延邊黃牛D型魏氏梭菌病間接ELISA診斷方法的建立.pdf

1、魏氏梭菌是一種梭狀芽孢屬條件性致病菌，該病廣泛分布于自然界，是腸道中的常在菌群之一。在一定條件下，可引起機體嚴重的疾病。延邊地區(qū)是魏氏梭菌病的高發(fā)區(qū)，尤其對延邊黃牛的危害極為嚴重。而針對該病的檢測尚無一套完整的血清學(xué)技術(shù)，因此，本研究將提取的D型魏氏梭菌制成菌體抗原，并建立了檢測該病的間接ELISA方法。 本實驗對間接ELISA的反應(yīng)條件進行了摸索，確定了最適工作條件。結(jié)果表明，美國Costar公司生產(chǎn)的酶標板的變異系數(shù)為4.5

2、％，達到間接ELISA的要求；D型魏氏梭菌菌體裂解抗原最適包被濃度為50μg/ml，最適包被條件為37℃1h；被檢血清的最適稀釋度為1：100，酶標二抗的最適工作濃度為1：1 000，血清與酶標二抗的反應(yīng)時間均為37℃1h；最適封閉時間為37℃1h；PBST稀釋液中脫脂乳的濃度為3％；底物最適反應(yīng)條件為室溫25min：陰陽性臨界值為0.032。經(jīng)特異性試驗和重復(fù)性試驗，表明建立的間接ELISA方法是特異的，且重復(fù)性好；對采集于延邊地區(qū)的