牛傳染性鼻氣管炎病毒的分離鑒定及其部分gB蛋白的原核表達(dá).pdf

1、牛傳染性鼻氣管炎(IBR)是由牛皰疹病毒Ⅰ型(BHV-1)引起的一種急性、熱性、接觸性傳染病。此病在全球范圍內(nèi)廣泛分布，主要損害牛的呼吸系統(tǒng)及生殖系統(tǒng)，給養(yǎng)牛業(yè)帶來(lái)巨大損失，其所具有的潛伏感染性更使得本病防控難度大而難以根除。BHV-1編碼的糖蛋白gB具有高度的保守性，在病毒吸附、侵入及感染細(xì)胞過(guò)程中發(fā)揮重要作用，是病毒復(fù)制所必需的結(jié)構(gòu)蛋白。該蛋白能夠誘導(dǎo)宿主體液及細(xì)胞免疫應(yīng)答，是進(jìn)行IBRV檢測(cè)的首選特異性抗原之一?；诖?，本文進(jìn)行了

2、以下三方面的研究:
　　1、牛傳染性鼻氣管炎的血清學(xué)和病原學(xué)檢測(cè)
　　為探究IBR在寧夏地區(qū)存在繁殖障礙的奶牛群中的流行情況，本研究針對(duì)寧夏地區(qū)的18個(gè)奶牛群中出現(xiàn)繁殖障礙的奶牛進(jìn)行血清的采集，共計(jì)470份，利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行IBR的血清學(xué)檢測(cè);同時(shí)采集疑似IBR感染而死亡的組織病料，共計(jì)16份，利用PCR技術(shù)進(jìn)行IBRV的檢測(cè)。結(jié)果顯示:所采集血清中存在338份IBR抗體陽(yáng)性血清，平均陽(yáng)性率為71.9％;而疑似病料中

3、存在7份IBRV陽(yáng)性病料。此結(jié)果表明牛傳染性鼻氣管炎已在寧夏地區(qū)奶牛群中開(kāi)始流行。
　　2、牛傳染性鼻氣管炎病毒的分離與鑒定
　　將經(jīng)PCR檢測(cè)鑒定為IBRV陽(yáng)性的組織臟器反復(fù)凍融處理幾次之后，取上清接種到MDBK細(xì)胞上進(jìn)行病毒的分離培養(yǎng)。結(jié)果從一份疑似IBR感染的犢牛肺臟中分離到了一株病毒，出現(xiàn)了明顯的細(xì)胞病變，通過(guò)病毒中和試驗(yàn)、PCR方法及核酸測(cè)序鑒定后，證實(shí)在寧夏地區(qū)成功分離到了牛傳染性鼻氣管炎病毒，并將其命名為IBR

4、V YF15株。
　　3、IBRV部分gB蛋白的原核表達(dá)
　　對(duì)gB蛋白進(jìn)行抗原性分析，在其胞外區(qū)選出一有效片段，并設(shè)計(jì)合成其特異性引物，以提取的分離株IBRV YF15的病毒基因組為模板擴(kuò)增出目的片段gBV。得到目的基因后將其插入表達(dá)載體pET32a中構(gòu)成重組質(zhì)粒，再轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，通過(guò)SDS-PAGE電泳鑒定及Western-blotting分析，得到了預(yù)期所需且高效表達(dá)的重組蛋白，并且重組蛋白能夠與