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1、目的: 本研究建立小鼠馬兜鈴酸腎病模型,通過(guò)觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子VEGF及其受體F1k1在腎組織的表達(dá),探討腎微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷在小鼠馬兜鈴酸腎病腎小管間質(zhì)纖維化中的作用。同時(shí)觀察共刺激分子CD40在小鼠腎組織中的表達(dá),探討馬兜鈴酸腎病腎小管間質(zhì)纖維化的免疫病理機(jī)制,為其干預(yù)治療提供新的靶分子。 方法: CD1小鼠腹腔注射馬兜鈴酸Ⅰ,分別于第3,10,21,35天處死。收集腎臟標(biāo)本,分別行HE染色和Masso
2、n三色染色,免疫組化染色以及western blot檢測(cè)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 1.HE染色和Masson染色結(jié)果顯示:病理變化早期表現(xiàn)為腎小管上皮細(xì)胞腫脹,空泡變性,壞死,腎間質(zhì)基本正常;隨著疾病發(fā)展,到疾病后期腎小管上皮細(xì)胞萎縮,塌陷,部分?jǐn)U張,腎間質(zhì)纖維化區(qū)域逐漸擴(kuò)大,腎間質(zhì)及腎血管周圍有大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。 2.免疫組化結(jié)果顯示:VEGF及其受體F1k1從注射后第3天起,均開始出現(xiàn)明顯下調(diào),從第10天起開始恢復(fù),但
3、在腎纖維化區(qū)則出現(xiàn)永久性下調(diào)改變。CD40在實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)腎組織的表達(dá)量均明顯增加,與對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 3.western blot檢測(cè)結(jié)果顯示:VEGF從注射后第3天起,開始出現(xiàn)明顯下調(diào),從第10天起開始恢復(fù),與免疫組化結(jié)果一致。CD40和α-SMA在實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)腎組織的表達(dá)量均明顯增加,與對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論: 1.應(yīng)用大劑量馬兜鈴酸Ⅰ建立小鼠馬兜鈴酸腎病模型,早期可引起急性腎損傷,后
4、期進(jìn)入慢性腎小管間質(zhì)纖維化期。盡管我們沒(méi)有鑒別是哪一種腎固有細(xì)胞轉(zhuǎn)分化,但腎組織α-SMA蛋白的上調(diào)性表達(dá)提示馬兜鈴酸可促使腎固有細(xì)胞向肌纖維母細(xì)胞轉(zhuǎn)分化,參與慢性腎小管間質(zhì)纖維化過(guò)程。 2.VEGF及其受體F1k1在腎組織的明顯下調(diào),表明腎微血管損傷參與了馬兜鈴酸腎病腎小管間質(zhì)纖維化過(guò)程。這表明VEGF可維持血管內(nèi)皮完整性并可能減輕腎小管間質(zhì)纖維化。 3.CD40在腎組織的上調(diào)性表達(dá),表明在馬兜鈴酸腎病中有免疫機(jī)制存在
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