2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本課題旨在從OATs角度探討AA腎臟轉運機制,為進一步研究AAN易感機制奠定基礎。 實驗一.大鼠腎臟缺血再灌注損傷后腎小管上皮細胞有機陰離子轉運蛋白的表達和功能變化目的探討大鼠腎臟缺血再灌注損傷后腎小管上皮細胞有機陰離子蛋白(OAT)1和3表達及功能變化。 方法:建立大鼠缺血再灌注腎損傷模型,于術后第1、2、4、6天取血及腎組織標本。處死前股靜脈插管輸注PAH,股動脈插管取血,膀胱插管留尿。用RT-PCR檢測OAT1/3

2、 mRNA表達。分別用免疫組織化學染色檢測腎臟組織OAT1和3蛋白表達;提取腎皮質勻漿和基側膜蛋白用Western blot檢測腎臟組織OAT1和3蛋白表達;毛細血管電泳儀檢測腎臟對氨基馬尿酸(PAR)排泄率;采用試劑盒測定腎皮質基側膜Na,K-ATPase活性;并行常規(guī)血肌酐濃度測定及腎臟組織形態(tài)學觀察。另設假手術組作對照。 結論:腎缺血再灌注導致腎小管損傷早期,腎小管OATl和3表達升高而PAR排泄率下降。Na-K-ATPa

3、se活性下降和OAT1和3分布異??赡苁瞧涔δ芟陆档闹饕獧C制。及時去除致病因素、避免內源性及外源性藥物及毒素加重小管負擔,對于損傷后小管功能的恢復可能具有重要意義 實驗二.有機陰離子轉運蛋白1在馬兜鈴酸腎細胞轉運及其細胞毒性中的作用目的探討有機陰離子轉運蛋白I(OAT1)在馬兜鈴酸I(AAI)腎細胞轉運中的作用及其毒效關系。 方法:體外構建重組大鼠OAT1(rOAT1)基因的真核表達質粒,將rOAT1重組質粒導入人胚腎細

4、胞(HRK 293)。觀察rOATl對對氨基馬尿酸(PAH)攝取的影響及動力學曲線。觀察rOAT1及rOAT1阻斷對AAI攝取的影響及動力學曲線。并分別觀察不同濃度AAI對轉染細胞caspase 3 mRNA和細胞凋亡的影響。Westernblot檢測轉染細胞rOAT1表達;毛細管電泳法檢測細胞內PAR濃度;高效液相色譜法(HPLC)檢測細胞內從濃度。RT-PCR檢測細胞caspase 3 mRNA表達,流式細胞法(Annexin V-

5、FITC)檢測細胞凋亡水平。 結論:轉染含rOATI質粒的HEK-293細胞特異性表達rOATl。AAI呈濃度依賴性和時間依賴性進入rOAT1轉染細胞,并呈劑量依賴性誘導OAT1表達細胞凋亡。提示OATl特異性介導AAI腎細胞轉運及細胞毒性。 實驗三.馬兜鈴酸腎病患者腎組織OAT1表達及其與腎間質纖維化相關性研究目的探討急性和慢性馬兜鈴酸腎病患者腎臟組織0AT1的表達水平、調節(jié)因素及其與腎小管間質纖維化的相關性。z方法

6、1997.1-2007.5中山大學附屬第一醫(yī)院確診為馬兜鈴酸腎病患者腎活檢組織標本(n=10)和外科手術切除腎臟遠離病灶部位的正常腎組織(n=5)。利用免疫組織化學技術進行腎臟組織OAT1、表皮生長因子(EGF)、纖維連接蛋白(FN)和α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)染色,應用圖像分析儀進行半定量積分。 結論:馬兜鈴酸腎病患者腎組織OAT1表達明顯降低。從導致腎小管損傷后,可能通過EGF下調而導致OAT1表達降低;而OAT1表達

7、下調,可能引起AA腎臟轉運清除低下,腎問質AA蓄積誘導間質細胞轉分化和間質纖維化。 綜上所述,我們得出以下結論: 1.急性腎缺血再灌注導致腎小管損傷早期,腎小管OAT1和3表達升高而PAH排泄率下降。Na,K-ATPase活性下降、0AT1和3分布異??赡苁瞧涔δ芟陆档闹饕獧C制。提示腎臟損傷時可能通過0AT1和3表達和功能變化對腎臟藥物和毒素清除產生影響。 2.轉染含rOAT1質粒的HEK-293細胞特異性表達r

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