福州地區(qū)急性呼吸道感染患兒HCoV-NL63、HCoV-229E、HBoV感染的檢測(cè)及分析.pdf

1、目的: 探討福州地區(qū)急性呼吸道感染患兒中新型人類冠狀病毒NL63(HumanCoronavirus NL63，HCoV-NL63)、人類冠狀病毒229E(Human Coronavirus 229E，HCoV-229E)、人類博卡病毒(Human Bocavirus，HBoV)的感染情況，并探討其臨床意義。 方法: 收集2006年11月～2007年5月冬春季福建省立醫(yī)院門診和住院急性呼吸道感染患兒鼻咽分泌物標(biāo)本2

2、23例。年齡15天～13歲。其中上呼吸道感染134例；下呼吸道感染89例。建立單一逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng) (ReverseTranscription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)檢測(cè) HCoV-NL63 1b、1a基因及HBoV NP1基因；巢式RT-PCR(nested RT-PCR，nRT-PCR)檢測(cè)HCoV-229EM基因。建立多重RT-PCR(multiplex RT-PCR，mRT-PCR

3、)同時(shí)檢測(cè)HCoV-NL63 1b基因、HBoV NP1基因及HCoV-229E M基因。對(duì)陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行核苷酸序列測(cè)定，并將HCoV-NL63、HBoV、HCoV-229E所測(cè)序列進(jìn)一步進(jìn)行同源性分析以及系統(tǒng)進(jìn)化樹分析。 結(jié)果: 1、223例標(biāo)本中，共檢出HCoV-NL63陽(yáng)性3例((1.3％)，HCoV-229E陽(yáng)性2例(0.9％)，HBoV陽(yáng)性9例(4.0％)。 2、3例HCoV-NL631b陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行

4、序列測(cè)定，序列證實(shí)為HCoV-NL63部分1b基因。對(duì)1b基因檢測(cè)陽(yáng)性的標(biāo)本再用1a基因的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行核苷酸序列測(cè)定，結(jié)果分析顯示核苷酸序列完全一致；與GenBank中HCoV-NL63部分代表株序列一致性達(dá)97％～100％，氨基酸一致性達(dá)100％。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析顯示HCoV-NL63與荷蘭的一株原型株(NC-005831)、加拿大代表株(AY675541)的親緣性最近。 3、2例HCoV-229E陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)

5、物進(jìn)行序列測(cè)定，結(jié)果分析顯示核苷酸序列完全一致，HCoV-229E陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物核苷酸序列與GenBank中部分HCoV-229E代表株序列一致性達(dá)98％-99％，氨基酸同源性達(dá)100％。 4、隨機(jī)選取3例HBoV陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行序列測(cè)定，結(jié)果分析顯示核苷酸序列完全一致，與GenBank中HBoV代表株序列一致性達(dá)到99％～100％，氨基酸同源性達(dá)100％；系統(tǒng)進(jìn)化樹分析顯示與瑞典一原型株Stockholm 2(st2，DQ000

6、496)及北京的代表株BJ3064、BJ3124(DQ988934，DQ353697)的親緣關(guān)系最近。 5、9例HBoV陽(yáng)性標(biāo)本中，患兒的年齡均為5歲以下，急性下呼吸道感染組陽(yáng)性率為7.9％(7/89)，顯著高于急性上呼吸道感染組的1.5％(2/134)(x2=5.27，P<0.05)。1例HBoV陽(yáng)性患者合并呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus，RSV)感染。 6、3例HCoV-NL6

7、3和2例HCoV-229E陽(yáng)性標(biāo)本均為急性下呼吸道感染的患兒。 7、運(yùn)用mRT-PCR對(duì)223份臨床標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果與用單一RT-PCR檢測(cè)HCoV-NL63、HBoV和用巢式RT-PCR檢測(cè)HCoV-229E結(jié)果完全一致。 結(jié)論: 1、HCoV-NL63、HCoV-229E和HBoV是福州地區(qū)2006～2007年冬春季急性呼吸道感染患兒的重要病毒病原。 2、HCoV-NL63病毒感染對(duì)低齡患兒可能引起嚴(yán)重