HCoV-NL63和HCoV-229E血清IgG抗體ELISA檢測(cè)法的建立及初步應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　分別建立人冠狀病毒NL63（Human Coronavirus NL63, HCoV-NL63）和人冠狀病毒229E(Human Coronavirus229E, HCoV-229E）的血清酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA），檢測(cè)兩種病毒血清IgG抗體，對(duì)其在福州地區(qū)兒童和青少年人群中的感染情況進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。
　　方法：
　　分別設(shè)計(jì)HC

2、oV-NL63核衣殼蛋白基因3’端463bp、HCoV-229E核衣殼蛋白基因3’端514bp片段的引物。擴(kuò)增這兩個(gè)片段并將其克隆到p ET-22b(+)載體上，并轉(zhuǎn)化到表達(dá)宿主大腸桿菌BL21，然后對(duì)克隆菌進(jìn)行鑒定。通過(guò)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)蛋白表達(dá)，對(duì)表達(dá)的重組蛋白進(jìn)行純化、鑒定。以經(jīng)過(guò)鑒定的純化重組蛋白為抗原建立血清ELISA法。以此法檢測(cè)收集到的442份0-20歲血清標(biāo)本中兩種病毒抗體，最后對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較分析。
　　結(jié)果：
　　

3、1、442份血清樣本中，HCoV-NL63抗體陽(yáng)性277份(62.7％)。其中，≤6月嬰兒陽(yáng)性率50.6%（40/79）；>6～12月嬰兒陽(yáng)性率67.1%(19/28)；>1～5歲個(gè)體陽(yáng)性率73.1%（125/171）；>5～10歲個(gè)體陽(yáng)性率62.5%（55/88）；>10～20歲個(gè)體陽(yáng)性率50%（38/76）。
　　2、HCoV-229E抗體陽(yáng)性241份(54.5%)。其中，≤6月嬰兒陽(yáng)性率49.4%（39/79）；>6～12月

4、嬰兒陽(yáng)性率64.3%（18/28）；>1～5歲個(gè)體陽(yáng)性率70.8%（121/171）；>5～10歲個(gè)體陽(yáng)性率48.9%（43/88）；>10～20歲個(gè)體陽(yáng)性率26.3%（20/76）。
　　結(jié)論：
　　1、成功建立了HCoV-NL63和HCoV-229E血清抗體的ELISA檢測(cè)法。
　　2、HCoV-NL63與HCoV-229E是福州地區(qū)兒童和青少年呼吸道感染的常見(jiàn)病原體，不同年齡段的陽(yáng)性率可能有差異。
　　3、