急性呼吸道感染兒童HBoV和HCoV-229E的實時熒光定量PCR檢測及臨床分析.pdf

1、目的: 分別建立人類博卡病毒(Human Bocavirus，HBoV)、人類冠狀病毒229E(HumanCoronavirus229E，HCoV-229E)的實時熒光定量PCR(real-time FluorescentQuantitative PCR，F(xiàn)Q-PCR)檢測方法，檢測呼吸道感染患兒標(biāo)本的HBoV、HCoV-229E，并探索其臨床意義。 方法: 分別根據(jù)HBoV NP1基因、HCoV-229E M基

2、因的保守序列設(shè)計引物和Taqman探針，擴增NP1基因、M基因片段，并將其克隆到pGEMT-Easy載體上，構(gòu)建質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品；建立FQ-PCR檢測方法，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，進行敏感性、特異性、重復(fù)性試驗；檢測收集到的195例臨床標(biāo)本中HBoV、HCoV-229E的感染情況，同時用普通PCR檢測這195例臨床標(biāo)本中的HBoV、HCoV-229E；將FQ-PCR結(jié)果與普通PCR結(jié)果進行比較分析。 結(jié)果: 1.FQ-PCR系統(tǒng)用于檢測

3、HBoV NP1基因，靈敏度為101copies/μl；對臨床其他常見呼吸道病毒不出現(xiàn)特異性擴增曲線；批內(nèi)變異系數(shù)為0.13％，批間變異系數(shù)為0.14％。 2.用FQ-PCR檢測195例臨床標(biāo)本，共檢出HBoV陽性12例(6.2％)。普通PCR檢測結(jié)果與FQ-PCR檢測結(jié)果一致。 3.12例HBoV陽性標(biāo)本中，患兒的年齡均為4歲以下，急性下呼吸道感染組陽性率為15.6％(10/64)，顯著高于急性上呼吸道感染組的1.5％

4、(2/131)(X2=12.45，P<0.005)。 4.FQ-PCR系統(tǒng)用于檢測HCoV-229E M基因，靈敏度為101copies/μl；對臨床其他常見呼吸道病毒不出現(xiàn)特異性擴增曲線；批內(nèi)變異系數(shù)為0.4％，批間變異系數(shù)為0.7％。 5.用FQ-PCR檢測195例臨床標(biāo)本，HCoV-229E陽性2例(1.0％)。普通PCR檢測結(jié)果與FQ-PCR檢測結(jié)果一致。 6.兩例HCoV-229E陽性標(biāo)本均為急性下呼吸