酪絲亮肽多囊脂質(zhì)體的研究.pdf

1、酪絲亮肽(Tyroserlenutide，YSL)為具有生物活性的小分子三肽，由三個氨基酸所組成，分子式為C18H27N3O6，其化學(xué)結(jié)構(gòu)為L-酪氨酰-L-絲氨酰-L-亮氨酸。藥效學(xué)實驗表明，酪絲亮肽可明顯抑制人肝腫瘤細(xì)胞Be17402在體內(nèi)外的生長，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度影響信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡和壞死而達(dá)到抗腫瘤效果，且無明顯毒副作用。酪絲亮肽在體內(nèi)很快被降解，血漿半衰期短，需要每日注射一次，注射30天為一個療程。為了

2、減少給藥次數(shù)，延長藥物體內(nèi)作用時間和延長藥效，在制劑學(xué)上可采用緩釋或控釋技術(shù)控制藥物的釋放。本文從制劑學(xué)角度出發(fā)，對YSL進(jìn)行了制劑學(xué)研究，期望制備出具有緩釋功能的酪絲亮肽多囊脂質(zhì)(Tyroserlenutide-Multivesicular liposome，YSL-MVL)，并對其基本理化性質(zhì)進(jìn)行初步考察。本文主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下： 首先本文對YSL進(jìn)行了處方前研究，采用等電聚焦法測定了YSL的等電點為4.8。初步對YSL

3、的溶解性能進(jìn)行考察，結(jié)果表明YSL易溶于冰醋酸，溶解于水，在乙醇中微溶，極微溶于四氫呋喃，不溶于乙醚和氯仿，YSL在50 mmol/L pH4.0的醋酸鹽緩沖液中的溶解度最大為21.670mg/ml，在pH5.0～7.5范圍內(nèi)溶解度為17.627mg/ml。同時測定了YSL的表觀油水分配系數(shù)為0.035，藥物親水性強(qiáng)。 建立了YSL的HPLC的測定方法，測定檢測限為2ng，定量檢測限為6ng，在2.00～50.00μg/mL線性

4、關(guān)系良好。 采用析因?qū)嶒炘O(shè)計法對YSL在溶液中的穩(wěn)定性影響因素進(jìn)行考察，測定YSL在不同條件下的降解速率常數(shù)k及降解半衰期t1/2，結(jié)果表明溶液中的pH值、緩沖鹽種類、緩沖鹽離子濃度及溫度對藥物的穩(wěn)定性影響嚴(yán)重。溫度升高時YSL降解加快；YSL在ABS中表現(xiàn)出最高的穩(wěn)定性，而在PBS中穩(wěn)定性降低，在CBS中最不穩(wěn)定，在ABS、PBS和CBS中YSL的最適pH值分別為4.08、4.02和8.08；氧氣的存在可能協(xié)同pH值的改變而間

5、接影響藥物穩(wěn)定性，YSL在溶液中的降解符合一級動力學(xué)方程。 其次，在處方前研究的基礎(chǔ)上，對YSL-MVL的處方組成和制備工藝進(jìn)行研究。選擇以SPC、CH、OA和TO為主要脂質(zhì)材料制備MVL，以單因素實驗和正交實驗設(shè)計優(yōu)選出處方油相中SPC用量為16.5mg/mL，CH用量為8.0mg/mL，TO用量為8.0mg/mL，OA用量為1.0mg/mL；篩選內(nèi)水相使用50mmol/L的pH4.0的ABS緩沖鹽，YSL濃度為10mg/mL

6、，內(nèi)水相蔗糖濃度7.5％；外水相為40mmol/L的L-賴氨酸，5％Sucrose，pH9.27；分散介質(zhì)為pH7.00的50 mmol/LABS溶液，蔗糖濃度為5％。對制備工藝進(jìn)行單因素實驗篩選，最終選擇油相與內(nèi)水相比為1:1；初乳制溫度為10～25℃；初乳剪切轉(zhuǎn)速為9000rpm，剪切時間10min；初乳與外水相比例為1:4；復(fù)乳剪切速度為3000rpm，剪切時間10sec；選擇以氮氣吹除氯仿；選擇以2500rpm離心10min沉淀

7、MVL。 最后，對YSL-MVL的基本理化性質(zhì)做了初步研究，測定最佳處方工藝條件下制備的YSL-MVL的平均粒徑大小為17.23μm，粒徑分布均勻，88.57％粒徑分布在10～30μm范圍，包封率為90.8％，粒子表面荷負(fù)電，zeta電位為(-44.53±4.10)mv。考察了YSL-MVL的釋放及影響其釋放的環(huán)境因素和處方因素，確定其釋放機(jī)制主要包括溶蝕和擴(kuò)散過程。初步考察YSL及YSL-MVL在血漿中的穩(wěn)定性，結(jié)果表明YSL