GOLPH2的糖基化修飾對(duì)于其參與肝癌發(fā)生的影響.pdf

1、目的：
　　本研究通過(guò)轉(zhuǎn)染GOLPH2及其糖基化缺失的重組質(zhì)粒進(jìn)入肝癌細(xì)胞HepG2,進(jìn)行體外功能學(xué)研究(細(xì)胞生長(zhǎng)與細(xì)胞周期)，探索GOLPH2的糖基化修飾對(duì)肝癌細(xì)胞的炎癥通路及膽固醇代謝通路的影響，從而揭示GOLPH2的糖基化修飾對(duì)于其功能發(fā)揮的影響。
　　方法：
　　構(gòu)建GOLPH2的109、144位糖基化位點(diǎn)雙突變質(zhì)粒，并命名為pcDNA3-Flag-GOLPH2(DM)，用脂質(zhì)體分別轉(zhuǎn)染GOLPH2 WT(野生

2、型GOLPH2重組質(zhì)粒)或者DM到肝癌細(xì)胞HepG2中，進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)與細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)、NF-κB報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)、炎癥小體及脂筏的免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　　細(xì)胞生長(zhǎng)與細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)表明，與野生型GOLPH2相比，糖基化位點(diǎn)突變GOLPH2會(huì)使細(xì)胞生長(zhǎng)與細(xì)胞周期減慢。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果表明，野生型GOLPH2能夠激活HepG2細(xì)胞中NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性，而雙糖基化位點(diǎn)突變會(huì)使GOLPH2失去此激活作用。免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢