環(huán)孢菌素A聯(lián)合苦參堿逆轉(zhuǎn)K562-ADM細胞多藥耐藥的研究及微流控芯片檢測藥物外排的應用.pdf

1、目的：本課題旨在研究環(huán)孢菌素A(CsA)及苦參堿(MAT)單獨及聯(lián)合應用對人慢性粒細胞白血病急性紅白血病變細胞株K562及其耐阿霉素(ADM)細胞株K562/ADM糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)表達的影響，以探討它們逆轉(zhuǎn)多藥耐藥(MDR)的作用機理，為環(huán)孢菌素A和苦參堿作為耐藥逆轉(zhuǎn)劑的臨床應用提供理論依據(jù)。并探討微流控芯片在檢測白血病耐藥細胞株藥物外排功能中的應用前景，為臨床逆轉(zhuǎn)MDR的藥物篩選提供新的策略和方法。

2、 方法：實驗組分為下列幾組：(1)K562/S敏感細胞組：(2)K562/ADM耐藥細胞組；(3)K562/ADM+CsA組；(4)K562/ADM+MAT組；(5)K56Z/ADM+CsA+MAT組。MTT法測定逆轉(zhuǎn)劑環(huán)孢菌素A或/和苦參堿的細胞毒性及藥物作用后的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)，流式細胞術(shù)測定細胞凋亡百分率的變化，以評價環(huán)孢菌素A、苦參堿單獨及聯(lián)合與阿霉素共同作用情況下對K562/ADM阿霉素耐藥的逆轉(zhuǎn)效果。熒光分光光度法、流式細胞儀(

3、FCM)檢測細胞內(nèi)藥物(ADM)濃度的改變，微流控芯片檢測白血病耐藥細胞株藥物外排。免疫組化法檢測MDR-1基因編碼的P-gp表達變化，流式細胞術(shù)定量檢測P-gp變化，以探討環(huán)孢菌素A及苦參堿逆轉(zhuǎn)MDR機制與P-gp介導的藥物轉(zhuǎn)運能力改變之間的關(guān)系。 結(jié)果：1.環(huán)孢菌素A和苦參堿對K562/5及K562/ADM均有明顯的抑制作用，且IC50接近，無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。非細胞毒性劑量的兩藥聯(lián)合應用后未出現(xiàn)毒性疊加，以環(huán)孢菌

4、素A及苦參堿對K562/ADM細胞的非細胞毒性劑量作為最佳的逆轉(zhuǎn)濃度；2.在與ADM合用時，K562/ADM+CsA組及K562/ADM+MAT組的IC50均低于K562/ADM耐藥組(P<0.01)，但高于K562/ADM+CsA+MAT組(P<0.01)，二藥聯(lián)合應用時逆轉(zhuǎn)倍數(shù)大于兩者單獨作用之和。與Annexin v-FITC流式細胞術(shù)檢測的細胞凋亡百分率增加是一致的；3.K562/ADM+CsA組、K562/ADM+MAT組和K

5、562/ADM+CsA+MAT組，細胞內(nèi)ADM濃度明顯增加，與K562/ADM對照組間有顯著性差異(P<0.01)。微流控芯片檢測結(jié)果和FCM法的結(jié)果基本一致；4.免疫組化法的結(jié)果顯示，與K562/S比較，K562/ADM細胞中P-gp呈高表達；5.與K562/ADM耐藥組比較，K562/ADM+MAT組P-gp表達量降低(P<0.01)，而K562/ADM+CsA組P-gp表達量無明顯變化(P>0.05)，但兩者聯(lián)合應用時作用大于兩者

6、單獨作用之和。 結(jié)論：1.環(huán)孢菌素A和苦參堿均是有效的抗腫瘤藥，且K562/ADM對其不具耐藥性，非細胞毒性劑量的兩藥聯(lián)合時無毒性的疊加；2.非細胞毒性劑量的環(huán)孢菌素A和苦參堿均可部分逆轉(zhuǎn)有多藥耐藥表型的細胞株K562/ADM對阿霉素的耐藥性，二者聯(lián)合應用效果優(yōu)于單獨應用，具有協(xié)同作用；3.微流控芯片檢測白血病耐藥細胞株藥物外排的方法具有一定可行性，在MDR逆轉(zhuǎn)藥物的篩選和腫瘤個體化治療方面有良好的應用前景；4.K562/ADM