骨髓間充質干細胞移植聯(lián)合高壓氧治療兔脊髓沖擊傷.pdf

1、目的：建立兔脊髓沖擊傷模型,利用兔骨髓間充質干細胞聯(lián)合高壓氧治療兔脊髓沖擊傷,評價其聯(lián)合治療效果是否優(yōu)于其兩種治療方法單獨應用的效果。
　　方法：在氣壓源為600kPa的壓力下應用霍普金森桿產(chǎn)生沖擊波建立T9-T10段脊髓損傷的脊髓沖擊傷大白兔模型,通過運動學Reuter、改良Tarlov評分和體感誘發(fā)電位選擇脊髓損傷程度相同的48只體重2.2~2.5kg清潔級健康新西蘭大白兔48只,隨機分為A組、B組、C組和D組,每組12只。1

2、2h后對各組分別作空白對照、高壓氧治療(20min加壓至200kPa,穩(wěn)壓30min,氧濃度維持在(86±2)％,20min緩慢減壓至正常,共70min。每天上、下午各1次,療程為20d)、骨髓間充質干細胞移植(約105/ml的骨髓間充質干細胞懸液采取直視下在T10椎體段稍下處用脊髓穿刺法緩緩注入0.5ml骨髓間充質干細胞懸液入蛛網(wǎng)膜下腔)、兩者聯(lián)合治療方面的干預。6周后行運動感覺功能評分(Reuter、改良Tarlov評分)、熒光細胞

3、免疫熒光示蹤、脊髓組織甲苯胺藍染色、脊髓組織凋亡免疫組化染色(Bax、Bcl-2檢測凋亡)等檢測,采用SPSS13.0軟件,運動學評分及熒光細胞數(shù)組間比較采用單因素方差分析,免疫組化的陽性率采用χ2檢驗,P<0.05認為有統(tǒng)計學差異。
　　結果：高壓氧治療組和骨髓間充質干細胞移植組的運動學評分及病理學指標均優(yōu)于空白對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),兩者聯(lián)合治療組的相關指標較其他治療組效果明顯,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05

4、)。1.應用體感誘發(fā)電位評價各組治療前后潛伏期及波幅差,治療后,D組恢復情況優(yōu)于其它三組,單獨細胞移植組次之,高壓氧組再次,空白組最不明顯。各組間具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。2.術后6周各組用Reuter和改良Tarlov評分法比較,其中D組效果優(yōu)于其它三組,單獨細胞移植組次之,高壓氧組再次,空白組最不明顯。差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。3.通過免疫熒光觀測D組熒光細胞數(shù)明顯多于C組,行手工計每組每張切片熒光細胞的總數(shù),D組熒光

5、細胞明顯多于C組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。4.應用甲苯暗藍染色,見A組神經(jīng)細胞胞質腫脹、脫髓鞘化,凋亡明顯;B組經(jīng)高壓氧治療,凋亡情況較A組減少,但仍然明顯;C組可見少量神經(jīng)細胞再生,凋亡亦較少;D組神經(jīng)細胞完整,脊髓灰白質形態(tài)完好,神經(jīng)細胞完整,未見明顯的細胞胞質腫脹、脫髓鞘化等凋亡表現(xiàn)。損傷階段有較多的神經(jīng)細胞再生。比較各組神經(jīng)細胞凋亡,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。5.取脊髓T10段脊髓行免疫組化Bcl-2、Bax檢

6、測凋亡,A~D組神經(jīng)細胞凋亡率較正常脊髓組織高,其中D組細胞凋亡表達率較其它組顯著減少,差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。6.治療6周后,通過TUNEL法檢測細胞凋亡評價不同治療組,神經(jīng)凋亡細胞數(shù)目多少不同,A組TUNEL陽性細胞表達強烈,可見棕褐色顆粒和塊狀物。B組凋亡細胞較A組減少,C組再較B組減少,聯(lián)合治療的D組凋亡細胞最少,少見陽性細胞表達,各組數(shù)據(jù)差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結論：單獨應用干細胞移植和高壓氧均