骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植聯(lián)合高壓氧治療兔脊髓沖擊傷.pdf

1、目的：建立兔脊髓沖擊傷模型,利用兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合高壓氧治療兔脊髓沖擊傷,評價其聯(lián)合治療效果是否優(yōu)于其兩種治療方法單獨(dú)應(yīng)用的效果。
　　方法：在氣壓源為600kPa的壓力下應(yīng)用霍普金森桿產(chǎn)生沖擊波建立T9-T10段脊髓損傷的脊髓沖擊傷大白兔模型,通過運(yùn)動學(xué)Reuter、改良Tarlov評分和體感誘發(fā)電位選擇脊髓損傷程度相同的48只體重2.2~2.5kg清潔級健康新西蘭大白兔48只,隨機(jī)分為A組、B組、C組和D組,每組12只。1

2、2h后對各組分別作空白對照、高壓氧治療(20min加壓至200kPa,穩(wěn)壓30min,氧濃度維持在(86±2)％,20min緩慢減壓至正常,共70min。每天上、下午各1次,療程為20d)、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植(約105/ml的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞懸液采取直視下在T10椎體段稍下處用脊髓穿刺法緩緩注入0.5ml骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞懸液入蛛網(wǎng)膜下腔)、兩者聯(lián)合治療方面的干預(yù)。6周后行運(yùn)動感覺功能評分(Reuter、改良Tarlov評分)、熒光細(xì)胞

3、免疫熒光示蹤、脊髓組織甲苯胺藍(lán)染色、脊髓組織凋亡免疫組化染色(Bax、Bcl-2檢測凋亡)等檢測,采用SPSS13.0軟件,運(yùn)動學(xué)評分及熒光細(xì)胞數(shù)組間比較采用單因素方差分析,免疫組化的陽性率采用χ2檢驗(yàn),P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果：高壓氧治療組和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植組的運(yùn)動學(xué)評分及病理學(xué)指標(biāo)均優(yōu)于空白對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),兩者聯(lián)合治療組的相關(guān)指標(biāo)較其他治療組效果明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05

4、)。1.應(yīng)用體感誘發(fā)電位評價各組治療前后潛伏期及波幅差,治療后,D組恢復(fù)情況優(yōu)于其它三組,單獨(dú)細(xì)胞移植組次之,高壓氧組再次,空白組最不明顯。各組間具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。2.術(shù)后6周各組用Reuter和改良Tarlov評分法比較,其中D組效果優(yōu)于其它三組,單獨(dú)細(xì)胞移植組次之,高壓氧組再次,空白組最不明顯。差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。3.通過免疫熒光觀測D組熒光細(xì)胞數(shù)明顯多于C組,行手工計每組每張切片熒光細(xì)胞的總數(shù),D組熒光

5、細(xì)胞明顯多于C組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。4.應(yīng)用甲苯暗藍(lán)染色,見A組神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)腫脹、脫髓鞘化,凋亡明顯;B組經(jīng)高壓氧治療,凋亡情況較A組減少,但仍然明顯;C組可見少量神經(jīng)細(xì)胞再生,凋亡亦較少;D組神經(jīng)細(xì)胞完整,脊髓灰白質(zhì)形態(tài)完好,神經(jīng)細(xì)胞完整,未見明顯的細(xì)胞胞質(zhì)腫脹、脫髓鞘化等凋亡表現(xiàn)。損傷階段有較多的神經(jīng)細(xì)胞再生。比較各組神經(jīng)細(xì)胞凋亡,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。5.取脊髓T10段脊髓行免疫組化Bcl-2、Bax檢

6、測凋亡,A~D組神經(jīng)細(xì)胞凋亡率較正常脊髓組織高,其中D組細(xì)胞凋亡表達(dá)率較其它組顯著減少,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。6.治療6周后,通過TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡評價不同治療組,神經(jīng)凋亡細(xì)胞數(shù)目多少不同,A組TUNEL陽性細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)烈,可見棕褐色顆粒和塊狀物。B組凋亡細(xì)胞較A組減少,C組再較B組減少,聯(lián)合治療的D組凋亡細(xì)胞最少,少見陽性細(xì)胞表達(dá),各組數(shù)據(jù)差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：單獨(dú)應(yīng)用干細(xì)胞移植和高壓氧均