紅松松塔多糖膜分離制備工藝及其活性研究.pdf

1、松塔作為林業(yè)副產(chǎn)品一度曾被忽視，近年隨著對(duì)其研究的深入，人們逐漸意識(shí)到這種以往廢棄的資源卻含有重要的生理活性成分，它在免疫調(diào)節(jié)及癌癥治療等方面均顯現(xiàn)出不容小覷的值得關(guān)注的功效，多糖是其主要活性成分之一。本課題針對(duì)紅松松塔多糖的分析、制備和生物學(xué)活性等方面，進(jìn)行了探索性研究，主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)如下:
　　1、建立了一種紅松松塔多糖含量測(cè)定新方法—3，5-二硝基水楊酸比色法（DNS法），文獻(xiàn)中尚未見有同類工作報(bào)道。與其它多糖含量測(cè)定方法相比，

2、該法不使用具有腐蝕性的濃硫酸，所用試劑穩(wěn)定，而且不需要對(duì)多糖進(jìn)行繁瑣的精制純化過(guò)程，即可排除單糖和其它雜質(zhì)成分的干擾。本實(shí)驗(yàn)中還對(duì)該含量測(cè)定方法進(jìn)行了反應(yīng)條件研究和方法學(xué)考察。結(jié)果表明，該方法操作簡(jiǎn)便，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于紅松松塔多糖的含量測(cè)定。
　　2、首次報(bào)道了將膜分離技術(shù)用于紅松松塔多糖制備工藝的系統(tǒng)研究，采用煎煮法提取多糖，經(jīng)濃縮后，用活性炭吸附等前處理方法去除提取液中部分雜質(zhì)，再對(duì)提取液進(jìn)行微濾進(jìn)一步除去雜質(zhì)、

3、此后進(jìn)行超濾分離純化。
　　首先，在預(yù)處理過(guò)程中，考察了活性炭吸附法的最優(yōu)條件，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，活性炭吸附可使料液中雜質(zhì)含量顯著降低，從源頭著手控制膜污染的發(fā)生。其次，分別考察了微濾過(guò)程中不同壓力、濃度、溫度下膜通量的變化趨勢(shì)，結(jié)果顯示:膜通量隨壓力、溫度的升高呈上升趨勢(shì)，隨料液濃度的升高呈下降趨勢(shì)，與理論知識(shí)相吻合。在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了正交試驗(yàn)，獲得了制備紅松松塔多糖的微濾最佳工藝條件為:料液溫度40℃，料液濃度25g/L，操作壓力0

4、.10MPa。最后還采用超濾方法對(duì)微濾滲出液進(jìn)行分離純化，制得紅松松塔多糖產(chǎn)物，超濾后多糖含量由超濾前的7.20％提高到44.70％，純化效果顯著。
　　3、實(shí)驗(yàn)中還采用不同截留分子量的超濾膜，對(duì)微濾后的料液進(jìn)行分級(jí)分離，得到了不同分子量的多個(gè)紅松松塔多糖組分，并通過(guò)分別測(cè)定其中紅松松塔多糖的含量，得出紅松松塔多糖的分子量分布情況:分子量＞10萬(wàn)的占9.50％，5萬(wàn)-10萬(wàn)之間的占70.20％，1萬(wàn)-5萬(wàn)之間的占3.20％，600

5、0-1萬(wàn)的占17.10％。該工作尚未見有文獻(xiàn)報(bào)道。
　　4、本論文中還首次報(bào)道了紅松松塔多糖的抑菌活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紅松松塔總多糖對(duì)大腸桿菌、青霉及釀酒酵母均有一定程度的抑制作用，其中對(duì)青霉抑制作用最強(qiáng)。對(duì)金黃色葡萄球菌沒有明顯抑制作用。紅松松塔總多糖水溶液對(duì)大腸桿菌的最小抑菌濃度均為0.5mg/mL;對(duì)青霉和釀酒酵母的最小抑菌濃度為0.25mg/mL。
　　脫蛋白后的紅松松塔總多糖對(duì)供試菌的抑制作用較脫蛋白前有明顯下降。

6、不同分子量的紅松松塔多糖對(duì)供試菌抑制作用不同，由強(qiáng)到弱依次為＞10萬(wàn)、5萬(wàn)-10萬(wàn)、1萬(wàn)-5萬(wàn)，而分子量6000-1萬(wàn)的紅松松塔多糖對(duì)供試菌無(wú)明顯的抑制作用。對(duì)于分子量＞10萬(wàn)和5萬(wàn)-10萬(wàn)之間的紅松松塔多糖而言，其對(duì)供試菌的抑制作用為青霉＞釀酒酵母＞大腸桿菌，即二者對(duì)真菌的抑制作用大于細(xì)菌。而分子量1萬(wàn)-5萬(wàn)的紅松松塔多糖對(duì)供試菌的抑制作用為大腸桿菌＞青霉＞釀酒酵母，即其對(duì)細(xì)菌的抑制作用大于真菌。
　　除以上創(chuàng)新點(diǎn)之外，本實(shí)驗(yàn)中

7、還對(duì)膜分離法和醇沉法制備紅松松塔多糖的工藝進(jìn)行了比較。結(jié)果顯示膜分離法制備的紅松松塔總多糖樣品多糖含量為44.70％，相比于醇沉法產(chǎn)物多糖含量23.88％有很大提高。另外通過(guò)膜分離工藝與水提醇沉工藝在生產(chǎn)成本、生產(chǎn)周期等多方面的比較，顯示出了膜分離的諸多優(yōu)勢(shì)。
　　目前，熱水提取是多糖提取的主要方法，本課題還進(jìn)行了該法與超聲提取方法的比較研究。結(jié)果顯示，與熱水提取法相比，超聲提取可以得到較高的多糖得率和多糖含量，由此可知超聲提取也