松塔多糖和黨參復(fù)方多糖顆粒劑的分析、制備及其抗氧化活性研究.pdf

1、現(xiàn)有研究表明，體內(nèi)脂質(zhì)過氧化是導(dǎo)致機(jī)體衰老，以及腫瘤、心腦血管等諸多疾病的重要原因之一，植物多糖的抗氧化活性常與抗腫瘤活性有一定關(guān)聯(lián)，并與許多疾病的防治相關(guān)，因此，天然多糖抗氧化劑的篩選日益引起人們的更多關(guān)注。
　　本課題以天然多糖為研究對(duì)象，分別進(jìn)行了多糖和多糖制劑的分析方法研究，以及松塔多糖和黨參復(fù)方多糖的提取分離與抗氧化活性研究、黨參復(fù)方多糖顆粒劑的制備和抗氧化活性研究等系列工作，主要內(nèi)容如下:
　　1、對(duì)多糖含量測(cè)定

2、方法--3，5-二硝基水楊酸比色法（DNS比色法）做出了重要改進(jìn)，收到多重良好效果，具有很好的實(shí)用性。
　　DNS法屬于多糖含量測(cè)定常用方法之一，具有許多突出優(yōu)點(diǎn)，在計(jì)算多糖含量時(shí)，該法需要以水解后的多糖樣品顯色液測(cè)定值減去水解前的樣品顯色液測(cè)定值，這種計(jì)算差值的方法在計(jì)算多糖含量的同時(shí)，還兼有去除雜質(zhì)干擾的優(yōu)點(diǎn)，其主要不足是增加了差值計(jì)算和相應(yīng)測(cè)定步驟。在本實(shí)驗(yàn)所建立的新方法中以水解前的樣品顯色液，取代原用的比色測(cè)定用空白液，因

3、而不必再進(jìn)行樣品液水解前、后測(cè)定值的差值計(jì)算，同時(shí)也省略了相應(yīng)的多步操作。與原方法相比，多糖含量測(cè)定結(jié)果基本一致，方法學(xué)考察各項(xiàng)指標(biāo)均符合規(guī)定。改進(jìn)后的DNS法既能簡(jiǎn)化計(jì)算與操作，又能避免空白溶液選用不當(dāng)所導(dǎo)致的顯色劑吸收干擾，具有多重良好效果。該方法可用于紅松松塔多糖的含量測(cè)定，對(duì)其它多糖的含量測(cè)定也可提供參考。
　　2、建立了黨參復(fù)方多糖顆粒劑中多糖含量測(cè)定的新方法--淀粉酶法聯(lián)合DNS改進(jìn)法進(jìn)行測(cè)定，有效克服了輔料淀粉干擾有

4、效成分多糖含量測(cè)定這一技術(shù)難點(diǎn)，文獻(xiàn)中尚未見有同類工作報(bào)道。
　　在應(yīng)用上述DNS改進(jìn)法對(duì)黨參復(fù)方多糖顆粒劑的有效成分多糖進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)曾遇到困難，因所用輔料淀粉也為多糖成分，導(dǎo)致DNS改進(jìn)法測(cè)定結(jié)果實(shí)際反應(yīng)的是總多糖含量，即有效成分多糖和輔料淀粉含量之和，文獻(xiàn)中未見相應(yīng)解決辦法。本實(shí)驗(yàn)中嘗試了下述思路:首先采用淀粉酶法除去顆粒劑中的輔料淀粉，將淀粉酶解為小分子雙糖后，再利用雙糖和多糖的醇溶性差異，以醇沉法分離出有效成分多糖，此后

5、即可使用DNS改進(jìn)法對(duì)該多糖進(jìn)行含量測(cè)定，避免淀粉的干擾;實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所建立的淀粉酶法和DNS改進(jìn)法聯(lián)合測(cè)定黨參復(fù)方多糖顆粒劑多糖含量的方法，成功克服了輔料淀粉對(duì)有效成分多糖含量測(cè)定的干擾，方法學(xué)考察各項(xiàng)指標(biāo)均符合規(guī)定，該方法可用于黨參復(fù)方多糖顆粒劑多糖含量測(cè)定，對(duì)于含有輔料淀粉的其它中藥制劑的多糖含量測(cè)定也可提供參考。
　　3、制備不同分子量的紅松松塔多糖，并進(jìn)行體外抗氧化活性研究，對(duì)多糖純化程度與其活性的相關(guān)性進(jìn)行初步探索。

6、
　　實(shí)驗(yàn)中采用膜分離工藝制備不同分子量的紅松松塔多糖，并對(duì)各組分進(jìn)行脫蛋白純化處理。測(cè)定各多糖產(chǎn)物的還原能力、清除DPPH·自由基能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同分子量的松塔粗多糖均具有體外抗氧化活性，呈現(xiàn)還原能力和清除DPPH·自由基活性，多糖濃度與其活性呈正相關(guān)，各粗多糖樣品脫蛋白后抗氧化活性均有降低。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，當(dāng)制備活性多糖時(shí)，不應(yīng)盲目進(jìn)行脫蛋白處理，有必要佐以相應(yīng)的活性實(shí)驗(yàn)提供參考。
　　4、在以上單一植物多糖活性研

7、究的基礎(chǔ)上，又進(jìn)行了中藥復(fù)方多糖的活性研究，對(duì)不同方法制備的黨參復(fù)方總多糖的抗氧化活性進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)純化程度與其活性的相關(guān)性進(jìn)行探索。
　　采用膜分離工藝制備黨參復(fù)方總多糖，并對(duì)得到的總多糖進(jìn)行脫蛋白、脫色等不同方法的純化，測(cè)定各多糖產(chǎn)物的還原能力、清除羥基自由基、DPPH·自由基及超氧陰離子自由基的能力。相關(guān)結(jié)果表明黨參復(fù)方總多糖呈現(xiàn)明顯的體外抗氧化活性，多糖活性隨其濃度增大而增強(qiáng)，總多糖經(jīng)脫蛋白、脫色等純化步驟后體外抗氧化活性

8、減弱。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，黨參復(fù)方總多糖具有較好的體外抗氧化活性，同時(shí)還進(jìn)一步驗(yàn)證了上述實(shí)驗(yàn)結(jié)論，在活性多糖制備工藝設(shè)計(jì)中不應(yīng)盲目純化，不應(yīng)輕易確定是否脫蛋白、脫色，有必要伴隨相應(yīng)的活性實(shí)驗(yàn)。
　　5、將上述黨參復(fù)方總多糖分離為不同分子量的多糖，分別進(jìn)行體外抗氧化活性測(cè)定。
　　實(shí)驗(yàn)中采用超濾技術(shù)制備不同分子量的黨參復(fù)方多糖，測(cè)定各多糖產(chǎn)物的還原能力、清除羥基自由基、DPPH·自由基及超氧陰離子自由基能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同分子

9、量的黨參復(fù)方多糖樣品均呈現(xiàn)體外抗氧化活性，并且具有良好的量效關(guān)系，黨參復(fù)方多糖的抗氧化活性隨其分子量的增大而增強(qiáng)。
　　6、對(duì)黨參復(fù)方多糖顆粒劑的制劑工藝、質(zhì)量檢查以及顆粒劑的抗氧化活性進(jìn)行研究。
　　在制劑工藝研究中，通過比較試驗(yàn)，優(yōu)選出顆粒劑的輔料種類及原料和輔料的配比，以稀乙醇為潤(rùn)濕劑進(jìn)行制粒，干燥，整粒，即得黨參復(fù)方多糖顆粒劑。體外抗氧化研究結(jié)果表明，黨參復(fù)方多糖顆粒劑具有較好的抗氧化活性，具有還原能力、清除羥基自由

10、基、DPPH·自由基及超氧陰離子自由基能力，樣品的多糖濃度與其活性呈正相關(guān)。由此可知，黨參復(fù)方多糖在制成顆粒劑后仍具有較好的體外抗氧化活性，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為黨參復(fù)方多糖制劑的后續(xù)研發(fā)提供參考依據(jù)。
　　本課題中建立了兩種新的分析方法，進(jìn)行了松塔多糖和黨參復(fù)方多糖的制備與分離，研究了紅松松塔多糖的抗氧化活性，以及黨參復(fù)方多糖及其制劑的抗氧化活性，以上系列研究取得了有意義的進(jìn)展，文獻(xiàn)中尚未見有相同工作報(bào)道。由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，來自廢棄資