慢性阻塞性肺疾病基質(zhì)金屬蛋白酶、apelin的表達及糖皮質(zhì)激素的治療作用和機制研究.pdf

1、目的：
　　 觀察慢性阻塞性肺疾病(COPD)基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物(TIMP)、apelin及血管緊張素Ⅰ型受體的相關(guān)蛋白(APJ)的變化，糖皮質(zhì)激素治療后對肺內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制物影響；探討基質(zhì)金屬蛋白酶、apelin-APJ系統(tǒng)在COPD發(fā)生、發(fā)展中的作用及糖皮質(zhì)激素對COPD的治療意義和作用機制。方法：
　　 1 COPD動物模型的制備：SD大鼠隨機分為三組：對照組、煙霧暴露組及布

2、地奈德治療組。除對照組外，其余兩組大鼠均每日在熏煙箱內(nèi)煙霧暴露，每日2次，每次連續(xù)被動吸煙20支(1h)，持續(xù)4個月，布地奈德組在最后一個月給予布地奈德霧化治療。檢測大鼠肺功能、支氣管肺泡灌洗液(BALF)中白細胞數(shù)量及分類并進行肺組織病理形態(tài)學(xué)觀察。
　　 2 采用ELISA法測定大鼠BALF中MMP-1、MMP-2及TIMP-2蛋白的表達；采用實時定量RT-PCR測定大鼠肺組織中MMP-1、MMP-2和TIMP-2mRNA的

3、表達。
　　 3 采用免疫組化檢測大鼠肺組織apelin和APJ蛋白的表達；應(yīng)用實時定量RT-PCR測定大鼠肺組織中aplin及APJ mRNA的表達。
　　 4 采用ELISA法測定COPD患者外周血中apelin、NO、NOS和Ang-Ⅱ的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1 與對照組比較，煙霧暴露組肺功能FEV0.3/FVC、Cdy明顯下降，Ri、Re明顯升高(P＜0.01);BALF中性粒細胞百分比明顯

4、增多(P＜0.01)，淋巴細胞百分比下降(P＜0.05)，白細胞總數(shù)增加（P＜0.01）；內(nèi)襯間隔(MLI)及支氣管壁厚/外徑顯著增加，平均肺泡數(shù)(MAN)顯著降低（均P＜0.01）。與煙霧暴露組比較，布地奈德治療后FEV0.3/FVC、Re、Cdy有明顯的改善（P＜0.05），白細胞總數(shù)下降（P＜0.01），各分類細胞百分比、MAN、MLI及支氣管壁厚/外徑無明顯改變（P＞0.05）。
　　 2 煙霧暴露組BALF中MMP-1

5、、MMP-2及TIMP-2蛋白含量較對照組高(P＜0.01)；與煙霧暴露組比較，布地奈德組MMP-1下降（P＜0.05），MMP-2和TIMP則無明顯變化（P＞0.05）。煙霧暴露組MMP-1、MMP-2 mRNA相對表達量明顯增高，分別是對照組的20.39和7.85倍，布地奈德組MMP-1、MMP-2 mRNA相對表達量下降，分別是對照組的3.01、4.35倍；煙霧暴露組TIMP-2 mRNA相對表達量是對照組的1.83倍，布地奈德組

6、相對表達量增加，是對照組的2.61倍。MMP-1、MMP-2、TIMP-2 mRNA與FEV0.3/FVC呈明顯負相關(guān)(r分別為-0.37、-0.52、-0.40;P＜0.05，P＜0.01，P＜0.05)。
　　 3 Apelin、APJ蛋白主要表達在支氣管肺組織的上皮細胞、肺泡巨噬細胞、血管內(nèi)皮細胞及部分肺泡壁細胞的細胞膜和細胞漿，對照組及煙霧暴露組apelin、APJ蛋白均呈陽性表達，但煙霧暴露組apelin、APJ蛋白表

7、達低于對照組(P＜0.05)。煙霧暴露組apelin、APJ mRNA相對表達量比對照組低44％及13％（P＜0.01）。大鼠肺組織apelin、APJ mRNA的表達與RV/(LV+S)均呈負相關(guān)關(guān)系（r分別為-0.454、-0.448;均P＜0.05）。大鼠肺組織apelin、APJ mRNA的表達與FEV0.3/FVC呈正相關(guān)（r值分別為0.529，0.475;均P＜0.05）。
　　 4 COPD患者血漿apelin、N

8、O、NOS水平較正常人低，肺動脈高壓組、心衰組進一步下降（P＜0.05）；COPD患者血漿Ang-Ⅱ的濃度較正常人高(P＜0.05)。血漿apelin、NO、NOS含量與肺動脈壓力呈線性負相關(guān)；apelin與FEV1％Pre呈正相關(guān)（r=0.797）；Ang-Ⅱ與FEV1％Pre呈負相關(guān)(r=-0.881)。
　　 結(jié)論：
　　 1 本實驗采用香煙煙霧吸入成功制備了COPD大鼠模型，給予布地奈德治療后肺內(nèi)炎癥細胞數(shù)量明顯

9、下降，并部分改善肺功能，但病理學(xué)未見明顯改變。
　　 2 MMP-1、MMP-2及TIMP-2在COPD大鼠肺內(nèi)表達增強，與COPD的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。布地奈德治療降低了MMP-1的表達，但未影響MMP-2及TIMP-2的表達，這可能與布地奈德能夠部分改善肺功能但不能改變病理形態(tài)有關(guān)。
　　 3 Apelin及其受體APJ蛋白和mRNA在COPD大鼠肺組織表達均下降，這可能與右心室肥大及肺功能下降密切相關(guān)，可能是導(dǎo)致大