慢性阻塞性肺疾病大鼠al-AT和NE的表達及糖皮質激素的治療作用和機制研究.pdf

1、目的：觀察中性粒細胞彈性蛋白酶(neutronphil elastase，NE)和α1-抗胰蛋白酶(alpha1 antitrypsin，al-AT)在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)大鼠肺組織及肺泡灌洗液中的表達，探討NE和al-AT在COPD發(fā)病中的作用及吸入糖皮質激素對其的影響。
　　方法：
　　1.采用煙熏法建立COPD動物模型。將30只大鼠分為

2、三組：對照組、煙霧暴露組及布地奈德組。除對照組外，另外兩組大鼠每日在熏煙箱內煙霧暴露，每日2次，每一次吸煙20支(1h)，持續(xù)總共4個月，在最后一個月給予布地奈德組布地奈德霧化治療。測量大鼠體重、肺功能、左右心室比值、支氣管肺泡灌洗液(bronchveolarlarage fluid，BALF)中白細胞數(shù)量及分類，并且對肺組織病理形態(tài)學進行觀察。
　　2.采用ELISA法檢測BALF中NE和al-AT的蛋白表達，采用免疫組化方法對

3、大鼠肺組織al-AT和NE蛋白的表達進行檢測，應用逆轉錄PCR方法(reverse transcription PCR，RT-PCR)對肺組織中al-AT mRNA和NE mRNA表達進行測定，觀察布地奈德對al-ATmRNA和NE mRNA表達的影響。
　　結果：
　　1.三組大鼠實驗前體重無明顯差異(P>0.05)。實驗結束后統(tǒng)計三組大鼠體重有顯著差異(P<0.01)：與對照組比較煙霧暴露組大鼠體重下降(P<0.01)；

4、布地奈德組大鼠體重也有明顯下降(P<0.01)，但較煙霧暴露組體重增加(P<0.05)。大鼠肺功能檢測結果顯示Ri、Re、FEV0.3/FVC、Cdy三組之間差異都具有統(tǒng)計學意義(分別P<0.01，P<0.05，P<0.05，P<0.05)。煙霧暴露組與對照組比較FEV0.3/FVC、Cdy明顯下降(均P<0.01)，Re、Ri明顯升高(P<0.01，P<0.05)；與煙霧暴露組比較，布地奈德治療后Re、Cdy、FEV0.3/FVC均有

5、改善(均P<0.05)，Ri雖下降但無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。煙霧暴露組與對照組比較，BALF中白細胞總數(shù)及中性粒細胞百分率顯著增多(均P<0.01)，淋巴百分率下降(均P<0.05)，內襯間隔(MLI)及支氣管壁厚/外徑(bronchial wallthickness/diameter，BWT/D)顯著增加(P<0.01)，平均肺泡數(shù)(MAN)顯著降低(P<0.01)。布地奈德治療后與煙霧暴露組比較，白細胞總數(shù)下降明顯(P<0.0

6、1)，各分類細胞百分比、MAN、MLI及BWT/D無明顯改變(均P>0.05)。
　　2. ELISA試劑盒檢測三組大鼠BALF中al-AT和NE的水平。煙霧暴露組與對照組比較，BALF中al-AT的蛋白量降低(P<0.01)，而NE的蛋白水平升高(P<0.01)。布地奈德治療后與煙霧暴露組比較，al-AT的蛋白量略升高，但無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，NE的蛋白量下降(P<0.01)。
　　3.應用免疫組化方法研究al-A

7、T和NE在肺組織中表達。與對照組比較，煙霧暴露組肺組織al-AT的表達降低(P<0.01)，NE表達升高(P<0.01)。與煙霧暴露組比較，布地奈德治療后al-AT的蛋白量略升高，但無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，NE的蛋白量下降(P<0.01)。
　　4.應用RT-PCR檢測al-AT mRNA和NE mRNA在大鼠肺組織中表達。煙霧暴露組al-AT mRNA的表達較對照組降低(P<0.01)，是對照組的(0.55±0.057)倍

8、；與煙霧暴露組比較，布地奈德治療后al-AT mRNA升高(P<0.05)，是對照組的(0.69±0.08)倍。煙霧暴露組NE mRNA的表達升高(P<0.01)，是對照組的(5.18±1.15)倍。與煙霧暴露組比較，布地奈德治療后NE mRNA降低(P<0.05)，是對照組的(2.74±0.90)倍。
　　結論：
　　1.大鼠被動吸煙4個月可成功建立COPD動物模型。給予布地奈德治療后體重、肺泡內炎性細胞、肺功能等指標較前