活化蛋白-1和糖皮質(zhì)激素受體在慢性阻塞性肺疾病中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景： 慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種具有氣流受限特征的疾病，氣流受限不完全可逆、呈進(jìn)行性發(fā)展，與肺部對有害氣體或有害顆粒的異常炎癥反應(yīng)有關(guān)。氣道慢性炎癥是COPD的特征性表現(xiàn)，其無論在COPD急性加重期和緩解期始終存在：并可能在COPD的氣道重塑、氣流阻塞以及肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生發(fā)展過程中均起著至關(guān)重要的作用。COPD由于其患病人數(shù)多，死亡率高，社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)重，己成為一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題。 它和支氣管哮喘(簡稱哮喘)

2、均存在氣道的慢性炎癥，是這兩種疾病均可使用糖皮質(zhì)激素(簡稱激素)治療的共同的理論基礎(chǔ)。在經(jīng)過50年的臨床應(yīng)用和研究發(fā)現(xiàn)，這兩種疾病對激素治療的療效反應(yīng)差異很大，激素能有效地緩解哮喘患者的癥狀，改善其肺功能，提高其生存質(zhì)量，因而已被確定為治療哮喘的一線藥物；而激素僅對少數(shù)COPD患者有效，對大多數(shù)COPD患者卻難見成效，不能逆轉(zhuǎn)其氣道的炎癥過程和阻止其肺功能的進(jìn)行性下降。這兩種疾病對糖皮質(zhì)激素的治療何以產(chǎn)生如此大的差異，其中的發(fā)生機(jī)制尚未

3、完全明了。糖皮質(zhì)激素通過糖皮質(zhì)激素受體發(fā)揮作用，人類糖皮質(zhì)激素受體分為兩個(gè)亞型：糖皮質(zhì)激素受體Q(humanGlucocorticoidreceptor-alphahGRQ)和糖皮質(zhì)激素受體β(humanGlucocorticoidreceptor-betahGRβ)。通常糖皮質(zhì)激素進(jìn)入胞漿后，結(jié)合糖皮質(zhì)激素受體Q，形成激素．受體復(fù)合物，并啟動(dòng)核移位信號(hào)介導(dǎo)入核內(nèi)，使受體結(jié)合到位于靶基因5、端上游的激素反應(yīng)元件(Glucocortico

4、idresponseelementsGILEs)，調(diào)控?cái)?shù)利靶基因的轉(zhuǎn)錄，這是比較經(jīng)典的作用途徑。但大多數(shù)受調(diào)控的靶基因啟動(dòng)子區(qū)域沒有GRE序列，許多研究發(fā)現(xiàn)，活化的hGRQ可以與AP—l，NF—xB等轉(zhuǎn)錄因子相互作用，改變他們的活性，間接調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄，發(fā)揮其抗炎作用?；罨鞍祝?(activatorprotein-1AP．1)主要由c-fos和c-jun蛋白組成，它是非常重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，它們可以調(diào)節(jié)許多炎性因子基因表達(dá)，導(dǎo)致炎癥

5、持續(xù)和發(fā)展，過度表達(dá)的AP．1可以與hGRQ相互作用，降低hGRQ的活性，導(dǎo)致對激素反應(yīng)較差。本實(shí)驗(yàn)對比研究了COPD患者與哮喘患者、正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞中hGR及AP．1的表達(dá)水平，探討慢性阻塞性肺疾病(COPD)發(fā)病的分子生物學(xué)機(jī)制及其可能影響糖皮質(zhì)激素(簡稱激素)反應(yīng)性的分子機(jī)制。 目的： 1．比較COPD患者組、哮喘患者組及正常對照組這三組受試者糖皮質(zhì)受體α和β亞單位的表達(dá)水平。 2．比較C

6、OPD患者組、哮喘患者組及正常對照組這三組受試者活化蛋白一1兩個(gè)亞單位c-los和c-jun的表達(dá)水平。 3．探討外周血單個(gè)核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞在COPD患者中的不同作用。 4．探討COPD患者中AP．1和hGRQ表達(dá)水平的相關(guān)性，及其對激素反應(yīng)性的影響，進(jìn)一步研究COPD發(fā)病的分子生物學(xué)機(jī)制，為更合理地治療COPD提供有力的理論基礎(chǔ)。 方法： 1．采用便攜式肺功能儀(HI-701，日本)，檢測所有受試對象

7、的肺功能。 2．抽取外周靜脈血，采用Ficoll-Paque密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，用紅細(xì)胞裂解法分離中性粒細(xì)胞(PMN)，用臺(tái)盼藍(lán)染液檢測細(xì)胞的活力，并采用瑞士．姬姆薩法染色后進(jìn)行細(xì)胞分類和計(jì)數(shù)。 3．逆轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測這三組受試者糖皮質(zhì)激素受體Q和β亞單位以及活化蛋白-1(c-fos和c-jun)的mRNA水平。 4．采用免疫細(xì)胞化學(xué)法(ICC)檢測這三組受試者

8、糖皮質(zhì)激素受體Q和p亞單位以及活化蛋白．1(c-fos和c-jun)的蛋白水平。 5．抗體特異性采用western法檢測。 結(jié)果： 1．PBMC中糖皮質(zhì)激素受體a、糖皮質(zhì)激素受體D、c-fos、c．jun的表達(dá)mRNA水平：COPD組中糖皮質(zhì)激素受體Q(hGRα)水平稍低于其他兩組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而糖皮質(zhì)激素受體β(hGRβ)的表達(dá)水平明顯高于哮喘組和正常對照組。COPD組和哮喘組之間c-fosmRNA的表達(dá)無

9、差異，但均高于正常對照組。而c-junmRNA的表達(dá)水平，COPD組中明顯高于哮喘組和正常對照組，且COPD組中hGRQ與c-jun之間均存在負(fù)相關(guān)性(r=-0．453P<0．05)。蛋白水平：hGRQ表達(dá)在三組之間無顯著性差異：而hGRβ的表達(dá)，COPD組明顯高于哮喘組和正常對照組，但哮喘組與正常對照組無明顯差異。c-fos的表達(dá)在COPD組和哮喘組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但均高于正常對照組，且c—iun的表達(dá)COPD組中明顯高于哮喘組和正

10、常對照組(尸均<0．05)。 2．外周血中性粒細(xì)胞中hGRQ、hGRβ、c-fos、c-jun的表達(dá)mRNA水平：COPD組中hGRβ的表達(dá)明顯高于哮喘組和正常對照組(P均<0．05)，但hGRQ、c-fos、c-jun的表達(dá)在這三組之間沒有差異顯著性。蛋白水平：外周血中性粒細(xì)胞中hGRQ、c-fos、c-jun表達(dá)水平在這三組之間尤統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。hGRB的表達(dá)水平COPD組明顯高于哮喘組和正常對照組。 結(jié)論： 高