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1、目的:不同濃度的IP6作用于人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT-29,觀察IP6對癌細(xì)胞分化的影響,并對其機制進行探討。 方法:將不同濃度的IP6(對照組,1.8mM,3.3mM)作用HT-29細(xì)胞不同時間(1d,3d,5d),分別進行如下研究: 1、使用透射電鏡觀察IP6對HT-29細(xì)胞超微形態(tài)的影響。 2、IP6作用3d后,使用流式細(xì)胞儀分析各組細(xì)胞周期。 3、應(yīng)用RT-PCR法檢測IP6對HT-29細(xì)胞內(nèi)c-Myc
2、 mRNA表達(dá)的影響。 4、使用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測IP6對HT-29細(xì)胞內(nèi)Rb、c-Myc蛋白表達(dá)的影響。 5、測定堿性磷酸酶比活性。 結(jié)果: 1、3.3mM IP6持續(xù)作用后,透射電鏡下可以觀察到細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,出現(xiàn)核固縮、細(xì)胞器豐富、微絨毛增多等分化趨勢。 2、IP6對HT-29細(xì)胞細(xì)胞周期有明顯的阻滯作用,并呈劑量依賴關(guān)系。流式細(xì)胞儀分析,G0/G1期細(xì)胞明顯增多,S期、G2/M期細(xì)胞則相
3、應(yīng)減少。 3、RT-PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)實驗結(jié)果顯示,與對照組相比,各濃度IP6均能使細(xì)胞內(nèi)e-Myc mRNA和蛋白的表達(dá)減少(P<0.05)。 4、免疫細(xì)胞化學(xué)實驗結(jié)果表明,IP6能夠上調(diào)Rb蛋白的表達(dá)(P<0.05)。 5、IP6作用HT-29細(xì)胞后,堿性磷酸酶比活性明顯增強。 結(jié)論:IP6能夠促使HT-29細(xì)胞向正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化。IP6可能通過上調(diào)Rb蛋白的表達(dá),下調(diào)c-Mye蛋白的表達(dá),阻滯細(xì)胞周期,誘導(dǎo)細(xì)
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