TRAIL與CPT-11聯(lián)用誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)、伊立替康(CPT-11)單用及兩藥聯(lián)用對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29體外增殖的影響，判斷其聯(lián)用是否存在協(xié)同效應(yīng)，初步探討TRAIL與CPT-11聯(lián)用能否誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29的凋亡及其可能機(jī)制。 方法：采用磺基羅丹明B(SRB)法檢測(cè)TRAIL、CPT-11單用和聯(lián)用對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29體外增殖的影響；采用Weeb系數(shù)分析兩藥聯(lián)用是否存在協(xié)同作用；采用DNA Ladder、

2、流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況；采用RT-PCR檢測(cè)TRAIL、CPT-11單用和聯(lián)用對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29死亡受體4(DR4)、死亡受體5(DR5)mRNA表達(dá)的影響；采用Western blot檢測(cè)TRAIL、CPT-11單用和聯(lián)用對(duì)Bax、Caspase-9蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果： (1)TRAIL濃度在0～10μg/ml范圍內(nèi)，細(xì)胞存活率與TRAIL濃度呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.779，P<0.05)，半數(shù)

3、抑制濃度(IC<,50>)>10μg/ml，提示結(jié)腸癌細(xì)胞株對(duì)TRAIL不敏感。當(dāng)TRAIL濃度為10μg/ml時(shí)，細(xì)胞存活率明顯低于其他各濃度組水平(P<0.05)。 (2)CPT-11濃度為0～10μg/ml范圍內(nèi)，細(xì)胞存活率與CPT-11濃度呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.863，P<0.05)，IC<,50><10μg/ml，提示結(jié)腸癌細(xì)胞株對(duì)CPT-11敏感。當(dāng)CPT-11濃度為10μg/ml時(shí)，細(xì)胞存活率明顯低于其他各濃度組

4、水平(P<0.05)；1μg/ml及5μg/ml CPT-11組細(xì)胞存活率均明顯低于陰性對(duì)照組及0.11μg/ml、0.5μg/ml CPT-11組水平(P<0.05)。 (3)除0.1μg/ml TRAIL+1μg/ml CPT-11、0.1μg/ml TRAIL+10μg/mlCPT-11、1μg/ml TRAIL+10μg/ml CPT-11組外，其余各聯(lián)用組的細(xì)胞存活率均明顯小于TRAIL單用及CPT-11單用組(P<0

5、.05)。 (4)Weeb系數(shù)顯示，只有0.1μg/ml TRAIL與5μg/ml CPT-11聯(lián)用時(shí)其細(xì)胞存活率小于70％的預(yù)估效應(yīng)，表明0.1μg/ml TRAIL與5μg/ml CPT-11聯(lián)用存在協(xié)同作用。 (5)DNA ladder及FCM結(jié)果顯示：CPT-11單用對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29凋亡無(wú)明顯影響；TRAIL單用和TRAIL與CPT-11聯(lián)用均能誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29凋亡，尤以聯(lián)用組更為顯著。

6、 (6)與陰性對(duì)照組相比，TRAIL、CPT-11單用或聯(lián)用雖然對(duì)DR4 mRNA的表達(dá)無(wú)明顯影響(P>0.05)，但聯(lián)用卻能明顯上調(diào)DR5 mRNA的表達(dá)(P<0.05)。 (7)與陰性對(duì)照及單用組相比，0.1μg/ml TRAIL與5μg/ml CPT-11聯(lián)用能明顯增強(qiáng)Bax、Caspase-9蛋白表達(dá)(P<0.05)。 結(jié)論： (1)結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29對(duì)TRAIL不敏感，對(duì)CPT-11敏感。