不同豬種免疫功能及免疫相關(guān)基因表達(dá)差異研究.pdf

1、本研究以我國(guó)培育品種中畜黑豬和大白豬為研究對(duì)象，對(duì)其白細(xì)胞總數(shù)、血清IgG、IL-12、IFN-γ濃度、中性粒細(xì)胞NBT還原力等免疫指標(biāo)進(jìn)行比較；采用DDRT-PCR技術(shù)對(duì)血液、脾臟組織基因差異表達(dá)進(jìn)行研究；并對(duì)部分差異表達(dá)序列進(jìn)行了電子延伸和RT-PCR驗(yàn)證。其目的在于闡明中外不同豬種抗病力不同的免疫學(xué)機(jī)理和分子基礎(chǔ)，為進(jìn)一步研究差異表達(dá)基因功能奠定基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下： 1.中畜黑豬血清IgG、IL-12、IFN-γ水平顯著高

2、于大白豬(P＜0.05或P＜0.01)；白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞NBT還原力、外周血液?jiǎn)魏思?xì)胞培養(yǎng)上清的IgG、IL-12等指標(biāo)品種間差異不顯著。 2.大白豬180日齡重與中畜黑豬差異顯著(P＜0.05)，出生重、斷奶重、下網(wǎng)重及180日齡背膘厚等生產(chǎn)性能指標(biāo)則無(wú)顯著性差異。 3.對(duì)免疫指標(biāo)間相關(guān)性進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)：血液IgG濃度與白細(xì)胞總數(shù)、外周血單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)上清IFN-γ相關(guān)性較低(r=0.157，0.191)，與血清、

3、外周血單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-12濃度及血清IFN-γ成負(fù)相關(guān)(r=-0.305，-0.267，-0.242)；中性粒細(xì)胞NBT還原力與血清IL-12、IFN-γ濃度正相關(guān)(r=0.481，0.515)；血清IL-12、IFN-γ間存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.643)。 4.對(duì)免疫指標(biāo)與生產(chǎn)性能指標(biāo)相關(guān)性分析得知，血清IgG濃度與下網(wǎng)重正相關(guān)(r=0.251)，而與180日齡體重成負(fù)相關(guān)(r=-0.157)；中性粒細(xì)胞NBT還原力與

4、180日齡體重成負(fù)相關(guān)(r=-0.256)；白細(xì)胞總數(shù)與出生重、斷奶重正相關(guān)(r=0.291，0.263)，而與下網(wǎng)重、180日齡體重及背膘厚負(fù)相關(guān)(r=-0.192，-0.333)；血清IL-12、IFN-γ濃度和斷奶重、下網(wǎng)重及180日齡體重負(fù)相關(guān)(r=-0.108/-0.296；-0.401/-0.607；-0.242/-0.473)，與出生重和180日齡背膘厚正相關(guān)(r=0.131/0.276；0.130/0.280)。

5、 5.利用DDRT-PCR技術(shù)從中畜黑豬和大白豬血液分離得到56條差異表達(dá)片段，其中17條反Norherning雜交驗(yàn)證為陽(yáng)性。5條在中畜黑豬血液特異性表達(dá)，4條在中畜黑豬表達(dá)水平高于大白豬，7條在大白豬血液特異性表達(dá)，1條在大白豬血液表達(dá)水平高于中畜黑豬。對(duì)陽(yáng)性片段進(jìn)行測(cè)序，用blast軟件進(jìn)行同源性檢索，其中6條與已知基因同源：差異表達(dá)片段BD2、BD16與豬細(xì)胞分裂周期20mRNA同源(90﹪，87﹪)，差異表達(dá)片段BD4與鼠上皮

6、膜蛋白2同源(99﹪)，差異表達(dá)片段BD8與豬MHCⅠ同源(92﹪)，差異表達(dá)片段BD10與鼠18S核糖體RNA同源(98﹪)，差異表達(dá)片段BD12與亮氨酸氨基肽酶同源(91﹪)；其余為未知序列。 6.利用DDRT-PCR技術(shù)從中畜黑豬和大白豬脾臟分離得到62條差異表達(dá)片段，其中17條反Norherning雜交驗(yàn)證為陽(yáng)性。8條在中畜黑豬脾臟特異性表達(dá)，1條在中畜黑豬脾臟表達(dá)水平高于大白豬，6條在大白豬脾臟特異性表達(dá)，2條在大白豬

7、脾臟表達(dá)水平高于中畜黑豬。對(duì)陽(yáng)性片段進(jìn)行測(cè)序，用blast軟件進(jìn)行同源性檢索，其中2條與已知基因同源：差異表達(dá)片段SD2與鼠188核糖體RNA同源(98﹪)，差異表達(dá)片段BD14與豬CC趨化性細(xì)胞因子受體基因同源(85﹪)；其余為未知序列。 7.對(duì)差異表達(dá)片段SD1(245bp)、SD11(443bp)進(jìn)行了電子延伸，分別得到1278和648bp序列；根據(jù)延伸的序列設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行RT-PCR驗(yàn)證，實(shí)際擴(kuò)增到一條969bp片段和三