基于2D-HPTLC技術(shù)的野葛異黃酮類化合物的代謝譜初步研究.pdf

1、代謝組學(xué)在藥用植物研究上的應(yīng)用，不僅可以揭示藥用植物中有效成分在植物體中的形成、轉(zhuǎn)化及其相互關(guān)系的本質(zhì)規(guī)律，闡明藥用植物有效成分的形成機(jī)理。同時(shí)，也可通過研究不同生態(tài)環(huán)境下藥用植物（生態(tài)型）的代謝產(chǎn)物，了解藥用植物的區(qū)域性分布，應(yīng)用于鑒別中藥道地藥材和指導(dǎo)藥材栽培，這對(duì)于中藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展將具有重要作用。
　　 代謝組分析技術(shù)多種多樣，其中，高效薄層色譜(HPTLC)具有設(shè)備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)易、展開速度快、分離能力強(qiáng)、斑點(diǎn)清晰集中、展開

2、劑組成多樣、色譜圖形象直觀等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用到化學(xué)合成、天然藥物的定性鑒別和純度檢驗(yàn)中。一般情況下，一維薄層色譜即可達(dá)到很好的分離效果，但對(duì)成分復(fù)雜的混合物尤其是植物提取物，簡(jiǎn)單的一維薄層色譜還很難達(dá)到理想的分離效果，這就需要更復(fù)雜的分離技術(shù)，常采用的有二維薄層色譜技術(shù)等。
　　 葛根是一種傳統(tǒng)中藥，也是藥、食兩用的天然植物資源，前人已對(duì)葛根進(jìn)行了深入研究，研究證明異黃酮類化合物是葛根的主要生物活性成分。迄今，經(jīng)鑒定的葛根異黃酮

3、類化合物己達(dá)到三十多種。同時(shí)，黃酮類化合物生物合成途徑己十分明確，相關(guān)酶和基因均己得到分離和鑒定，因此，黃酮類化合物通常被選擇為植物次生代謝生理研究的模式系統(tǒng)。
　　 本文以野葛和粉葛為試材，嘗試初步建立基于2D-HPTLC分析技術(shù)的異黃酮類化合物代謝譜分析平臺(tái)；并通過對(duì)不同產(chǎn)地、不同年限的野葛和粉葛樣品中異黃酮類化合物的代謝譜分析，研究異黃酮類化合物的累積規(guī)律。該課題不僅研究了不同產(chǎn)地、不同年限的野葛和粉葛樣品中異黃酮類化合物

4、的累積規(guī)律，而且對(duì)豐富代謝組學(xué)研究技術(shù)方法都具有重要的意義。實(shí)驗(yàn)取得以下主要結(jié)果：
　　 比較了不同固定相、不同流動(dòng)相的2D-HPTLC分離效果，篩選并確定了以聚酰胺為固定相，流動(dòng)相體系：第一維為水：正丁醇：丙酮：1，4-二氧六環(huán)=70:15:10:5(v/v)；第二維為苯：甲醇：丁酮：水=55:25:23:2(v/v)的2D-HPTLC分離技術(shù)條件，實(shí)現(xiàn)了對(duì)野葛異黃酮類化合物的有效分析檢測(cè)，并結(jié)合數(shù)據(jù)分析處理，初步建立起了異黃

5、酮類化合物代謝譜分析方法。
　　 野葛和粉葛根樣的2D-HPTLC分析結(jié)果表明，野葛和粉葛的共有成分含量有很大的差異，單位干重粉葛樣品中異黃酮化合物含量遠(yuǎn)低于野葛異黃酮化合物的含量。生長(zhǎng)年限對(duì)野葛異黃酮含量有很大影響，多數(shù)異黃酮類化合物組分隨著生長(zhǎng)年限的增長(zhǎng)而含量減少，但有個(gè)別異黃酮組分含量增加。不同產(chǎn)地野葛樣品的2D-HPTLC圖譜有一定的相似性，但異黃酮含量有較大差異，其中，葛根素、3’-甲氧基葛根素和大豆苷的含量由高到低依

6、次為九華山野葛、舒城3年生野葛、金寨3年生野葛、蕪湖橫崗野葛；而大豆甙元的含量由高到低依次為九華山野葛、金寨3年生野葛、舒城3年生野葛、蕪湖橫崗野葛。不同產(chǎn)地粉葛樣品的2D-HPTLC圖譜有一定的相似性，但異黃酮含量有一定的差異，其中，葛根素和大豆苷的含量依次為贛葛5號(hào)粉葛、江西吉安粉葛、寧國(guó)2號(hào)粉葛、蕪湖南陵粉葛。
　　 從安徽舒城產(chǎn)野葛根樣中共分離得到14個(gè)單體化合物，通過HPLC、NMR（包括氫譜和碳譜）和ESI-MS分析

7、，己鑒定出它們的結(jié)構(gòu)，分別為3’一甲氧基葛根素（化合物1）、大豆甙（化合物2）、芒柄花苷（化合物3）、染料木苷（化合物4）、印度黃檀苷（化合物5）、大豆苷元（化合物6）、葛根素（化合物7）、染料木素8-C-葡萄糖甙（化合物8）、芒柄花素8-C-芹菜糖基-(1-6)葡萄糖甙（化合物9）、4’，7-二羥基-8-C-β-呋喃葡萄糖基異黃酮（化合物10）、刺芒柄花素（化合物11）、4’，7-二甲氧基大豆苷元（化合物12）、(+)野葛醇B-2”-

8、O-葡萄糖甙（化合物13）和芒柄花素8-C-木糖基-(1-6)葡萄糖甙（化合物14）。其中化合物10、12為首次從該屬植物中分離得到的已知化合物。
　　 從安徽舒城野葛的愈傷組織中分離得到的異黃酮化合物有：大豆甙(化合物2)、芒柄花苷（化合物3）、染料木苷（化合物4）、大豆苷元（化合物6）、葛根素（化合物7）和染料木素（化合物15）。
　　 由此可見：野葛根樣與愈傷組織中異黃酮類化合物有著明顯差異，根樣中以葛根素、3'-