HP-PRRSV感染仔豬胸腺細(xì)胞凋亡的鑒定及凋亡相關(guān)因子mRNA表達(dá)水平的檢測(cè).pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是豬的一種免疫抑制性疾病，該病的主要特征是感染仔豬的呼吸困難，機(jī)體消瘦，生長緩慢，懷孕母豬表現(xiàn)為流產(chǎn)等繁殖障礙癥狀。該病于20世紀(jì)90年代分別出現(xiàn)在歐洲和美國，隨后蔓延至全球，并成為持續(xù)影響全球養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的疫病之一。PRRS病原為PRRS病毒(PRRSV)，該病毒是屬于動(dòng)脈炎病毒科的有囊膜的單股正鏈RNA病毒。20

2、06年給我國養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴(yán)重危害的“豬高熱病”經(jīng)研究證實(shí)其病原為高致病性PRRSV(HP-PRRSV)。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)HP-PRRSV(HUN4毒株)感染可造成斷奶仔豬胸腺發(fā)生嚴(yán)重萎縮，進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證實(shí)胸腺的萎縮與胸腺內(nèi)細(xì)胞的凋亡有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)的目的在于進(jìn)一步對(duì)胸腺內(nèi)的凋亡細(xì)胞進(jìn)行鑒定，并對(duì)感染豬萎縮胸腺內(nèi)凋亡相關(guān)因子mRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。
　　 為闡明HP-PRRSV感染仔豬胸腺內(nèi)凋亡細(xì)胞、感染細(xì)胞的類型及感染細(xì)胞與凋亡

3、細(xì)胞的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)取HP-PRRSV感染仔豬及對(duì)照仔豬的新鮮胸腺，制作冰凍切片，用于免疫熒光染色，并通過激光共聚焦觀察，從而對(duì)損傷胸腺內(nèi)的HP-PRRSV感染與凋亡進(jìn)行鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，凋亡細(xì)胞并未感染HP-PRRSV，同時(shí)確定胸腺中凋亡細(xì)胞為CD3+細(xì)胞;感染細(xì)胞為CD14+細(xì)胞。
　　 為明確HP-PRRSV感染仔豬胸腺內(nèi)凋亡相關(guān)因子的變化，本實(shí)驗(yàn)通過建立檢測(cè)凋亡相關(guān)因子TNF-α、 TNFR1、 FasL、Fas、 Bax、

4、Bcl-2、Caspase-8和Caspase-3的mRNA的表達(dá)水平的SYBRGreenⅠ熒光定量檢測(cè)方法，并對(duì)HP-PRRSV感染仔豬及對(duì)照仔豬胸腺內(nèi)TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、Caspase-8和Caspase-3的mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:與同日齡對(duì)照仔豬相比，HP-PRRSV感染仔豬胸腺內(nèi)與外源性凋亡通路有關(guān)的凋亡相關(guān)因子如TNF-α、TNFR1、Caspase-8和Caspa