肝細胞肝癌的新非編碼基因及病毒相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景
　　 肝細胞肝癌（肝癌）是一種高度異質(zhì)的惡性腫瘤，嚴重危害中國人民的健康，其發(fā)生發(fā)展是一種多基因、多環(huán)境因素協(xié)同作用的過程，需要經(jīng)歷多個病理階段，涉及多種分子事件。近幾年對于肝癌非編碼。RNA（ncRNA）的有限研究雖然得到了一些有提示意義的數(shù)據(jù)，但是尚未達到大規(guī)模轉(zhuǎn)錄組學(xué)水平，特別是small ncRNA和mRNA-like ncRNA在肝癌中差異表達的報道幾乎為空白。本研究擬通過用芯片研究新ncRNA在肝癌中的差異

2、表達，填補肝癌相關(guān)ncRNA高通量研究的空白，首次建立肝細胞特定長度范圍的ncRNA高通量測序模型，成為國際領(lǐng)先的研究領(lǐng)域。另一方面，中國的肝癌絕大多數(shù)發(fā)生于慢性乙型肝炎（乙肝）、肝硬化的基礎(chǔ)之上。雖然乙肝在中國無論是絕對數(shù)量還是相對比例在世界上都居前列，但是由于慢性乙肝的并發(fā)癥通常要幾十年才能觀察到，大陸地區(qū)頗具說服力的大宗前瞻性隊列研究乙肝與肝癌相關(guān)的報告稀缺，尚缺乏直接針對臨床轉(zhuǎn)歸結(jié)果的長期隨訪研究證據(jù)。
　　 目的

3、>　　 發(fā)現(xiàn)肝癌特異表達的新非編碼基因。
　　 發(fā)現(xiàn)肝癌早期診斷標記物。
　　 探索肝癌發(fā)生機制，輔助肝癌基因分型、治療方案選擇和預(yù)后預(yù)測。
　　 探索乙型肝炎病毒感染狀態(tài)與肝癌發(fā)生的相關(guān)性。
　　 方法：
　　 研究一：計算處理構(gòu)建大型ncRNA數(shù)據(jù)庫。收集不同分化程度的HCC及相應(yīng)癌旁組織標本，系統(tǒng)性記錄患者的臨床病理特征，構(gòu)建特異性ncRNA文庫。用新發(fā)現(xiàn)的small ncRNA和mRNA

4、-1ike ncRNA制備芯片，通過與芯片雜交，尋找肝癌中差異表達的靶基因，并用RT-PCR和Northern印跡驗證。整合已有芯片數(shù)據(jù)，建立肝癌相關(guān)ncRNA數(shù)據(jù)庫。
　　 研究二：回顧性分析北京協(xié)和醫(yī)院和佑安醫(yī)院收治的接受肝切除術(shù)、并經(jīng)病理確診的乙肝相關(guān)性肝癌患者的病歷資料，以及協(xié)和醫(yī)院體檢中心的乙肝相關(guān)檢查結(jié)果。
　　 結(jié)果：
　　 研究一構(gòu)建了4個大型ncRNA數(shù)據(jù)庫：NONCODE，antiCODE，H

5、Ptaa和HPtam。在肝癌標本中識別出30條差異表達的新ncRNA，選擇其中6條進行并獲得Northern印跡驗證。
　　 研究二共納入371名乙肝相關(guān)性肝癌患者，男/女：317/54；中位年齡53歲；ALT中位值41 U/L，48.5％在診斷時ALT水平正常；HBsAg攜帶者87.6％，乙肝大三陽15.9％，小三陽65.5％，HBsAg血清清除12.4％。與普通人群相比，乙肝相關(guān)性肝癌患者的大小三陽之比無顯著性差異（P=0.

6、1460）。139人檢測了HBV DNA水平，拷貝數(shù)<103/mL、103-104/mL以及>104/mL的比例分別為51.1％、8.6％和40.3％。體檢結(jié)果中HBsAg攜帶率為2.74％（3，548/129，568）。單位組織體檢者（136/810）和個人體檢者（283/1，333）大小三陽之比存在顯著性差異（P=0.0383）。
　　 結(jié)論：
　　 研究一表明，肝癌中存在諸多特異性表達的新非編碼RNA，它們在肝癌相

7、關(guān)領(lǐng)域的研究中頗具希望。需要進一步探索其功能；分析它們與臨床病理特征之間的關(guān)系，用于肝癌診治及分型；構(gòu)建肝癌轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，理解肝癌發(fā)生發(fā)展機制；并可探索新的靶向治療基因來幫助阻止癌變。
　　 研究二提示，乙肝小三陽患者發(fā)生肝癌的風(fēng)險可能與大三陽患者相似；HBVDNA拷貝數(shù)低于103/mL者依然可能有較高的肝癌發(fā)生風(fēng)險。目前亟需匯集各主要醫(yī)療機構(gòu)和流行病監(jiān)控機構(gòu)的資料，進行大規(guī)模臨床調(diào)查，為真正意義上的乙肝一級、二級和三級預(yù)防提供