維生素D及其受體與乙型肝炎病毒相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　肝癌(liver cancer)是指發(fā)生在肝臟的惡性腫瘤，依據(jù)肝癌來(lái)源分為原發(fā)性肝癌和轉(zhuǎn)移性肝癌兩種，其中肝細(xì)胞肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC，簡(jiǎn)稱肝癌)占原發(fā)性肝癌的90％。HCC是目前世界第五大常見腫瘤之一，位列第二位的癌癥死亡原因，每年大約有一百萬(wàn)人死于HCC，其中大約50％發(fā)生在中國(guó)，具有較高的發(fā)病率和病死率;在我國(guó)80％的HCC患者有乙型肝炎病毒(hepatitis B viru

2、s，HBV)或丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)感染基礎(chǔ)，發(fā)病隱匿，早期臨床癥狀不明顯，診斷率較低;大多數(shù)患者確診時(shí)，病情已經(jīng)發(fā)展到中晚期，失去手術(shù)治療機(jī)會(huì)，而且HCC生物惡性程度較高，5年生存率低，預(yù)后欠佳。目前HCC仍是慢性病毒性肝炎、肝硬化患者的主要死亡原因之一。近年研究發(fā)現(xiàn)，維生素D可通過與其受體(vitamin D receptor，VDR)結(jié)合而發(fā)揮抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡和分化等抗腫瘤作用。本研究

3、通過檢測(cè)HBV相關(guān)HCC患者血清維生素D水平、肝組織VDR mRNA及VDR蛋白的表達(dá)，研究血清維生素D水平、肝組織VDR mRNA及VDR蛋白在HCC患者及健康對(duì)照組之間的差異，以及VDR mRNA、VDR蛋白在癌組織和癌旁組織及正常組織中的表達(dá)差異，來(lái)探討維生素D與HCC發(fā)生發(fā)展的作用及抗腫瘤可能機(jī)制。
　　方法:
　　收集2013年3月至2014年11月于河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院住院患者，共32例，其中HBV相關(guān)HCC患者

4、20例，另外12例選取同期在河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院健康體檢者，作為健康對(duì)照組，20例HCC患者中收集到其中10例接受肝移植患者的肝組織，另外收集肝移植供體的正常肝組織4例。HCC的診斷符合2011年版《原發(fā)性肝癌診治規(guī)范》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B CHB)的診斷符合2010年版《慢性乙型肝炎防治指南》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。并且2010年版《慢性乙型肝炎防治指南》和2011年版《原發(fā)性肝癌診治規(guī)范》由中華醫(yī)

5、學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)及肝病學(xué)分會(huì)聯(lián)合制定。檢測(cè)患者血清生化指標(biāo)、凝血功能及HBVDNA載量，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)肝組織VDR mRNA的表達(dá)，免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)肝組織內(nèi)VDR表達(dá)部位，Western Blot檢測(cè)肝組織VDR蛋白表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清維生素D的水平。比較血清維生素D水平在HCC患者及健康對(duì)照組之間的差異。
　　結(jié)果:
　　1 HCC組、健康對(duì)照組人口學(xué)及臨床特點(diǎn)
　　HCC組、健康對(duì)照組之間患

6、者年齡和性別具有可比性，HCC患者組血清白蛋白(albumin，ALB)（31.71±5.08）、凝血酶原活動(dòng)度(prothrombin activity, PTA)（89.77±7.77）均低于正常對(duì)照組ALB（36.91±4.73）、PTA（107.58±6.89）;丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanineaminotransferase,ALT)（62.95±40.20）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransfer

7、ase，AST)（39.90±21.51）、直接膽紅素(direct bilirubin，DBIL)（4.29±1.87）則高于正常對(duì)照組ALT（6.28±3.26）、AST（16.26±4.41）、 DBIL（3.55±1.26）; HCC組總膽紅素(total bilirubin，TBIL)（14.81±4.29）與健康對(duì)照組TBIL（12.11±1.87）無(wú)明顯差別，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。（見Table.1）。

8、　　2 HCC組、健康對(duì)照組患者血清中VD水平
　　ELISA檢測(cè)示:HCC患者組血清維生素D水平（40.59±9.39 ng/ml）低于正常對(duì)照組VD水平（93.42±24.13 ng/ml），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）（見Fig.1）。
　　3 HCC組、健康對(duì)照組患者肝組織VDR的表達(dá)
　　免疫組織化學(xué)法檢測(cè)VDR在HCC組織、癌旁組織及正常組織均表達(dá)，VDR主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞核中基本無(wú)表達(dá)（見Fig

9、.2和Fig.3）。RT-PCR法檢測(cè)VDR在HCC組織、癌旁組織及正常組織中的表達(dá)，結(jié)果顯示:VDR mRNA（2.77±0.30）在癌組織中表達(dá)明顯高于癌旁組織（1.62±0.21）及正常肝臟（1.57±0.19）組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)（見Fig.4）。Western Blot結(jié)果示:HCC組織VDR蛋白（1.15±0.57）的表達(dá)均高于癌旁組織表達(dá)（1.02±0.25）及正常肝臟組織（0.37±0.11），差異具