原代及傳代兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞細(xì)胞骨架的研究.pdf

1、目的：利用激光掃描共聚焦顯微鏡(laserconfocalscanningmicroscope，LCSM)觀察傳代軟骨細(xì)胞細(xì)胞骨架(cytoskeleton，CSK)在形態(tài)與蛋白量方面與原代軟骨細(xì)胞的差異，以闡明軟骨細(xì)胞CSK隨傳代發(fā)生的變化。 方法：雄性8月齡新西蘭白兔3只，空氣栓塞處死動物，無菌條件下分離雙膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞并行單層培養(yǎng)，取原代(P0)及傳1、2代(P1、2)的軟骨細(xì)胞，分別接種于底部置有圓形蓋玻片的24孔板中行

2、細(xì)胞爬片，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞鋪展后進(jìn)行固定，利用免疫熒光抗體分別對各代軟骨細(xì)胞CSK蛋白成分肌動蛋白、波形蛋白、微管蛋白和紐蛋白進(jìn)行熒光染色后，利用LCSM觀察各代軟骨細(xì)胞CSK形態(tài)：利用熒光強度測定軟件對各代軟骨細(xì)胞CSK蛋白熒光強度進(jìn)行測定。 結(jié)果：軟骨細(xì)胞微絲呈絲狀，分布于細(xì)胞質(zhì)外圍靠近細(xì)胞膜處，沿細(xì)胞輪廓排列走行，而在核周則無微絲分布；微絲隨傳代有增粗趨勢，在P2軟骨細(xì)胞中可見增粗的微絲纖維。紐蛋白呈斑點狀，位于微絲靠

3、近細(xì)胞膜的末端；紐蛋白斑點數(shù)量隨傳代減少。中間纖維呈細(xì)絲狀，形成相互交織的貫穿胞漿的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，在胞漿內(nèi)的熒光強度不均一，部分軟骨細(xì)胞中可見中間纖維在核周形成密集分布；P1及P2軟骨細(xì)胞中間纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)變松散且核周密集分布減少。微管在核周呈放射狀散向整個細(xì)胞，形成松散并相互交織的貫穿胞漿的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，胞漿內(nèi)熒光強度較均一；P1及P2軟骨細(xì)胞在細(xì)胞周圍形成的微管突起較P0增多。對P0、P1及P2軟骨細(xì)胞CSK蛋白熒光強度定量測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，P1

4、及P2軟骨細(xì)胞肌動蛋白熒光強度較P0明顯升高(P＜0.05)，而P1與P2則無明顯差別(P＞0.05)；軟骨細(xì)胞波形蛋白和微管蛋白熒光強度隨傳代逐漸下降(P0＞P1＞P2，兩兩比較P＜0.05)。 結(jié)論：傳代軟骨細(xì)胞CSK形態(tài)有所變化，表現(xiàn)為隨傳代微絲增粗，紐蛋白斑點數(shù)量減少，中間纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)變松散且核周密集分布減少，并且在細(xì)胞周邊形成的微管突起增多。與原代軟骨細(xì)胞相比，傳代軟骨細(xì)胞肌動蛋白量明顯升高而微管蛋白和波形蛋白量明顯降