鈣調神經磷酸酶信號轉導通路在介導尾加壓素Ⅱ致心肌肥大中的作用及其機制研究.pdf

1、目的： 心肌肥大不僅是心血管疾病發(fā)生猝死的重要預測因子，還是導致心力衰竭的危險因素，因而研究心肌肥大的發(fā)生機制對于心力衰竭和其它肥厚型心肌病變的防治具有重要意義。近來發(fā)現(xiàn)，尾加壓素II(Urotensin II，un)可誘導心肌細胞產生肥大效應，但是其致心肌細胞肥大的原因和機制不太明確。研究表明，鈣調神經磷酸酶(Calcineurin，CaN)信號轉導通路在壓力超負荷性心肌肥大中發(fā)揮著關鍵作用，是超負荷性心肌肥大的重要上游調節(jié)機

2、制。為弄清CaN信號轉導通路是否參與了UII誘導的心肌肥大反應，本實驗以離體培養(yǎng)的SD乳鼠心肌細胞為研究對象，從分子與細胞水平觀察UII所致的心肌肥大反應中，CaN、MAPK信號通路中若干信號分子的變化，探討UII致心肌肥大的機制，CaN信號轉導通路在UII致心肌肥大中的作用及機制，以及CaN信號轉導通路和MAPK等其它信號通路在心肌肥大中的相互關系，為臨床防治心肌肥大及心力衰竭提供理論依據。 方法： 以離體培養(yǎng)的SD乳

3、鼠心肌細胞為研究對象，用UII干預，建立離體培養(yǎng)的新生鼠肥大心肌細胞模型。運用Real time-PCR法，Western blot技術等，觀察UII對培養(yǎng)心肌細胞的形態(tài)學、DNA與蛋白質合成的影響，以期證實UII可誘導典型的心肌肥大效應，以及心肌肥大過程中CaN、MAPK信號轉導通路中相關分子、蛋白的表達變化。運用熒光探針標記技術，觀察un對心肌細胞內Ca2+濃度變化的影響；進一步應用相關拮抗劑，觀察UII引起心肌細胞內Ca2+濃度變

4、化是否為胞外Ca2+內流或肌漿網鈣庫釋放所致。 結果： ①隨著un濃度的增加，心肌細胞β-MHC、CaN以及磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)等的mRNA和蛋白表達明顯增加，其中10-8、10-7 mol/L UII處理組與對照組相比較，增加顯著(P<0.05)。②用10-8 mol/L UII處理心肌細胞12h、24h、48h，隨著時間增加，心肌細胞β-MHC、CaN以及P-ERK1/2等的mRNA和蛋白表達呈遞增

5、趨勢，其中處理24h組與正常對照組有顯著差異(P<0.05)。③預先用環(huán)胞素A(cyclosporin A，CsA)5μmol/L處理正常心肌細胞24h，然后用10-8 mol/L UII作用24h，心肌細胞p-MHC、CaN以及P-ERKI/2等的mRNA和蛋白表達下調，與正常心肌細胞經10-8 mol/L UII單純作用24h差異有顯著意義(P<0.05)。④正常對照組心肌細胞內鈣離子熒光強度較低(31.65±2.37)。⑤單純UI

6、I干預組鈣離子熒光強度與正常對照組比較，增加明顯(87.13±5.72)(P<0.05)。⑥尼卡地平提前阻斷+UII干預組以及IP3受體拮抗劑Xestspongin C+UII干預組鈣離子熒光強度也有增加，分別為(59，43±4，76)、(54.79±5.18)，與正常對照組比較，增加明顯(P<0.05)，但增加幅度小于10-8 mol/L UII單純作用組(P<0.05)。 結論： ①鈣調神經磷酸酶(CaN)信號轉導通

7、路可能在心肌肥大中起重要作用。鈣調神經磷酸酶(CaN)在心肌肥大過程中與UII作用呈現(xiàn)劑量、時間相關性，其效應可被CaN阻斷劑CsA阻斷。②MAPK信號轉導通路可能參與了UII誘導的心肌細胞肥大過程。其效應亦可部分被CsA阻斷。鈣調神經磷酸酶(CaN)信號轉導通路和MAPK信號轉導通路之間可能存在“互話”關系。③尾加壓素II(UII)可引起心肌細胞內鈣離子濃度增高，其主要通過兩方面：細胞外的鈣離子內流；肌漿網鈣離子釋放。本實驗提示，UI