醋柳黃酮通過鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶途徑抑制心肌肥厚的研究.pdf

1、 目的：探討醋柳黃酮是否通過鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶途徑抑制心肌肥厚。方法：(1)通過腹主動(dòng)脈縮窄法構(gòu)建高血壓心肌肥厚大鼠模型,隨機(jī)分成 4 組(n=8)：對(duì)照組(Control 組,飲用水 10ml.kg-1.d-1)；卡托普利組( CP 組, 100mg.kg-1.d-1 )；醋柳黃酮組( TFH 組, 30 mg.kg-1.d-1)；聯(lián)合組(Com組,CP 60 mg.kg-1.d-1+TFH 20 mg.kg-1.d-1),另8只作為假

2、手術(shù)組(Sham組,飲用水10ml.kg-1.d-1),連續(xù)灌胃干預(yù)6周。(2)采用套尾法測量術(shù)前,術(shù)后1周,術(shù)后7周大鼠尾動(dòng)脈血壓。(3)左心室重量/體重比測定：術(shù)后 7 周,大鼠血壓測量后,稱重、麻醉,立刻取出心臟,剪斷肺動(dòng)脈,肺靜脈,主動(dòng)脈,上、下腔靜脈。取出心臟后用預(yù)冷的0.1mol.L-1、PH 7.4 PBS洗滌,清潔濾紙吸干,沿二尖瓣水平分離心房與心室,去除右心室,稱重。計(jì)算左心室重量/體重比(g/100g)。(4)左心室

3、心肌病理觀察：取部分左心室,4%甲醛固定,石蠟包埋,切片,HE染色,顯微鏡下觀察。(5)測定各組鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)活性：取凍存心肌100mg左右,手動(dòng)勻漿,12000轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘后取上清液,采用CaN活性測定試劑盒測定。(6)測定各組肌漿網(wǎng)鈣泵(SERCA)活性：稱取凍存心肌組織 100mg ,組織勻漿后立即檢測,操作嚴(yán)格按照超微量Ca2+-ATPase測定試劑盒說明書進(jìn)行。(7)RT-PCR法測定各組大鼠心肌CaN-mRN

4、A表達(dá)。結(jié)果：(1)各組大鼠血壓比較：組內(nèi)比較,假 手術(shù)(Sham)組血壓手術(shù)前后無明顯變化；對(duì)照組(Control)及各用藥組(均行腹主動(dòng)脈縮窄術(shù))大鼠術(shù)后 1 周血壓較術(shù)前明顯升高(157.9±6.72vs103.2±8.28mmHg,P<0.05)；各用藥組(CP組、TFH組、Com 組 ) 術(shù) 后 7 周 血 壓 較 術(shù) 后 1 周 血 壓 明 顯 降 低( 135.8±4.94vs157.9±6.72mmHg,P<0.05 )

5、、( 141.1±5.60vs157.9± 6.72mmHg,P<0.05)、(119.5±6.69vs157.9± 6.72mmHg,P<0.05)。組間比較,術(shù)后 1 周對(duì)照組及各用藥組血壓明顯高于假手術(shù)組(157.9±6.72vs105.1±8.27mmHg,P<0.05)；各用藥組(CP組、TFH組、Com 組)術(shù)后 7 周血壓明顯低于對(duì)照組( 135.8±4.94vs168.3± 4.78mmHg,P<0.05)、(141.1

6、±5.60vs168.3±4.78mmHg,P<0.05)、(119.5± 6.69vs168.3±4.78mmHg,P<0.05 ),聯(lián)合組( Com )降壓效果最好( P<0.05 ), TFH 組與 CP 組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(141.1±5.60vs 135.8±4.94mmHg,P>0.05)。(2)各組大鼠左室重量/體重比比較：腹主動(dòng)脈縮窄后,Control 組大鼠左室重量/體重比增加,顯著高于 Sham組(0.24±0.

7、0085vs0.18±0.0036,P<0.05)。與Control組比較,CP組、TFH組、Com組大鼠左室重量/體重比明顯將低(0.19±0.0054vs0.24± 0.0085,P<0.05)、(0.20±0.0076vs0.24±0.0085,P<0.05)、(0.18±0.0043vs 0.24±0.0085,P<0.05),其中Com組降低最明顯(P<0.05),CP組與TFH 組比較, CP 組左室重/體重比更低,差異有統(tǒng)

8、計(jì)學(xué)意義(0.19±0.0054vs0.20±0.0076,P<0.05)。(3)各組心肌HE染色鏡檢：光鏡下見Sham組心肌細(xì)胞形態(tài)正常,排列整齊,Control組心肌細(xì)胞增粗肥大,排列紊亂,間隙疏松水腫,細(xì)胞核深染,伴有分支。各用藥組較Control組明顯改善,心肌細(xì)胞縮小,排列較整齊,間隙變窄。各用藥組之間變化 HE 片上不能區(qū)分。(4)各組 CaN 活性比較：與Sham 組 相 比 , Control 組 心 肌 中 CaN 活

9、 性 明 顯 升 高(0.66±0.10vs0.25±0.07 U/mgprot ,P<0.01)； 與Control組相比,CP組、TFH 組、Com 組 CaN 活性明顯降低( 0.47±0.09vs0.66±0.10 U/mgprot , P<0.01 )、( 0.49±0.08vs0.66±0.10 U/mgprot , P<0.01 )、(0.36±0.06vs0.66±0.10 U/mgprot ,P<0.01),且以Com

10、組降低最明顯(P<0.05)；TFH 組與 CP 組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.49±0.08vs0.47±0.09U/mgprot ,P>0.05)。(5)各組SERCA活性比較：與 Sham 組相比, Control 組心肌中 SERCA 活性明顯降低(19.79±0.80vs27.1±0.63μmolPi/mgprot/hour,P<0.01)； 與Control組相比, CP 組、TFH 組、Com 組 SERCA 活性明顯升高

11、( 24.90± 0.79vs19.79±0.80μmolPi/mgprot/hour,P<0.01)、(24.32±0.70vs19.79± 0.80μmolPi/mgprot/hour , P<0.01 )、( 25.43±0.67vs19.79±0.80μmo lPi/mgprot/hour,P<0.01),各用藥組間兩兩比較,TFH組與CP組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(24.32±0.70vs24.90±0.79μmolPi/mgp

12、rot/hour, P>0.05),TFH 組與 Com組比較,SERCA 活性降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(24.32±0.70vs25.43±0.67μmolPi/mgprot/hour , P<0.01),CP組與Com 組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(24.90±0.79vs25.43±0.67μmolPi/mgprot/hour ,P>0.05)。(6)各組CaN-mRNA表達(dá)比較：與Sham組相比 , Control 組 心 肌 中 C

13、aN-mRNA 表 達(dá) 明 顯 升 高(0.41±0.03vs0.08±0.01,P<0.01)； 與Control組相比,CP組、TFH組、Com 組 CaN-mRNA 表達(dá)明顯降低(0.27±0.02vs0.41±0.03,P<0.01)、(0.29±0.03vs0.41±0.03,P<0.01)、(0.12±0.01vs0.41±0.03,P<0.01),且以Com組降低最明顯(P<0.05)；TFH組與CP組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意