食管癌及正常組織中MT-2A位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)mRNA含量的影響.pdf

1、目的:食管癌在河北省南部及河南省北部的發(fā)病率居世界之首，對(duì)人類的健康和生命構(gòu)成嚴(yán)重的威脅。在世界范圍內(nèi)食管癌病死率位于惡性腫瘤的第七位，其發(fā)病率在我國惡性腫瘤中居第四位。因此，對(duì)食管癌的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行深入的研究有助于食管癌的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，同時(shí)對(duì)評(píng)估食管癌患者的預(yù)后具有深遠(yuǎn)的理論和臨床意義。已有研究表明，食管癌是一種多基因遺傳性疾病，且受環(huán)境因素的影響較大，其發(fā)生是多種癌基因激活與抑癌基因失活長期相互作用的結(jié)果。
　　 金

2、屬硫蛋白(MTs)是一類低分子量、富含半胱氨酸、廣泛存在于人和哺乳動(dòng)物中的小金屬結(jié)合蛋白質(zhì)。迄今為止已經(jīng)發(fā)現(xiàn)四個(gè)亞型的MT(MT-1-4)，其中MT-2A是MT-Ⅱ亞型中唯一一個(gè)具有生物學(xué)作用的蛋白質(zhì)，研究表明，食管組織中MT-2A的表達(dá)能促進(jìn)組織向不典型增生-食管癌序列的發(fā)展，且MT-2A高表達(dá)的食管鱗狀細(xì)胞癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率明顯的高于低表達(dá)的患者，因而可以判斷MT-2A在很大程度上起到了癌基因的作用。食管癌中MT各亞型

3、呈現(xiàn)不同的高表達(dá)狀態(tài)，這一高表達(dá)狀態(tài)可能與基因突變有關(guān)。我們前期研究發(fā)現(xiàn)10例食管鱗癌癌組織及其邊緣正常組織中MT-2A外顯子1上游區(qū)域存在一個(gè)A/G多態(tài)位點(diǎn)，為研究食管癌及其正常組織中MT-2A位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)mRNA含量的影響，本課題應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄PCR(reversetranscriptionPCR,RT-PCR)技術(shù)，檢測新鮮食管癌標(biāo)本及其對(duì)應(yīng)癌旁“正常”食管粘膜組織中MT-2A基因mRNA表達(dá)情況，旨在研究多態(tài)位點(diǎn)為G的標(biāo)本中MT-2

4、A基因mRNA表達(dá)情況與相應(yīng)位點(diǎn)為A的標(biāo)本中MT-2A基因mRNA表達(dá)情況之間的關(guān)系，及其與各臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.取河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院東院胸外科于2010年5月-2011年12月手術(shù)切除的新鮮食管癌組織及其癌旁“正?！苯M織40例，其中10例患者食管癌組織及其癌旁“正?！苯M織中發(fā)現(xiàn)MT-2A外顯子1上游區(qū)域存在一個(gè)A/G多態(tài)位點(diǎn)。全組男性24例，女性16例，年齡范圍在55-73歲，中位年齡為

5、65歲，從手術(shù)切除的標(biāo)本中獲取食管癌組織，取距食管癌組織外緣5cm以上“正常”粘膜組織作為正常對(duì)照組。采集過程需在低溫環(huán)境下進(jìn)行，采集的組織標(biāo)號(hào)后放入液氮中保存，待其術(shù)后病理證實(shí)為鱗狀細(xì)胞癌后方可作為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本。
　　 2.把所采取的實(shí)驗(yàn)標(biāo)本切割成大小約0.5×0.5×0.5mm的組織做成蠟塊。采用HE染色的方法對(duì)所得蠟塊進(jìn)行鑒定，以保證采集食管癌旁組織中不含有癌細(xì)胞。
　　 3.切割部分標(biāo)本行HE染色后，從剩余標(biāo)本提取R

6、NA，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)對(duì)MT-2AmRNA的表達(dá)進(jìn)行研究。
　　 4.對(duì)所得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料應(yīng)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，分析多態(tài)位點(diǎn)為G的標(biāo)本中MT-2A基因mRNA表達(dá)情況與相應(yīng)位點(diǎn)為A的標(biāo)本中MT-2A基因mRNA表達(dá)情況之間的關(guān)系，及其與各臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.實(shí)驗(yàn)所取標(biāo)本均經(jīng)HE染色，證實(shí)食管癌組織均為食管鱗

7、狀細(xì)胞癌，癌旁“正?！闭衬そM織中均不含有食管癌細(xì)胞。
　　 2.組織總RNAD260nm/D280nm等于1.9，這表明組織總RNA的濃度較高，可用來進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增。提取組織總RNA行瓊脂糖凝膠電泳后，顯示3條清晰的條帶，分別為28S、18S、5S，說明提取組織總RNA無明顯降解，完整性較好。
　　 3.MT-2AmRNA在多態(tài)位點(diǎn)為G的標(biāo)本中食管癌旁“正常”粘膜組織與相應(yīng)位點(diǎn)為A的標(biāo)本中食管癌旁“正常”粘膜組織表

8、達(dá)情況統(tǒng)計(jì)學(xué)分析P＞0.05(P=0.80)，兩者之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.MT-2AmRNA在相應(yīng)位點(diǎn)為A的標(biāo)本中食管癌組織與其癌旁“正?！闭衬そM織表達(dá)情況統(tǒng)計(jì)學(xué)分析P＞0.05(P=0.08)，兩者之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5.MT-2AmRNA在多態(tài)位點(diǎn)為G的標(biāo)本中食管癌組織與其癌旁“正常”粘膜組織表達(dá)情況統(tǒng)計(jì)學(xué)分析P＜0.05(P=0.03)，兩者之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 6.MT-2AmRNA在多態(tài)

9、位點(diǎn)為G的標(biāo)本中食管癌組織與相應(yīng)位點(diǎn)為A的標(biāo)本中食管癌組織表達(dá)情況統(tǒng)計(jì)學(xué)分析P＜0.05(P=0.04)，兩者之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 7多態(tài)性位點(diǎn)為G的標(biāo)本中食管癌組織中的MT-2AmRNA含量與患者的性別、腫瘤部位、病理分期、組織分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無關(guān)。(P均＞0.05)
　　 結(jié)論:
　　 1.多態(tài)性位點(diǎn)為G的標(biāo)本中食管癌旁“正?！闭衬そM織與相應(yīng)位點(diǎn)為A的標(biāo)本中食管癌旁“正?！苯M織的MT-2AmRNA表

10、達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。即多態(tài)性位點(diǎn)為G的標(biāo)本中食管癌旁“正?！苯M織的MT-2AmRNA與相應(yīng)位點(diǎn)為A的食管癌旁“正?！苯M織的MT-2AmRNA的含量無差異。
　　 2.相應(yīng)位點(diǎn)為A的標(biāo)本中食管癌組織與其癌旁“正?！闭衬そM織的MT-2AmRNA表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。即相應(yīng)位點(diǎn)為A的標(biāo)本中食管癌組織MT-2AmRNA與其癌旁“正常”組織中MT-2AmRNA的含量無差異。
　　 3.多態(tài)性位點(diǎn)為G的標(biāo)本中食管癌組織與其癌旁“正常”粘