益氣化痰祛瘀膠囊對肺纖維化大鼠的實驗研究.pdf

1、目的:觀察益氣化痰祛瘀膠囊對博萊霉素致大鼠肺纖維化(Pulmonaryfibrosis,PF)的相關細胞因子系統(tǒng)一纖維四項[血清中Ⅲ型膠原(Ⅲtype of collagen),Ⅳ型膠原(Ⅳ type of collagen)及層粘連蛋白(Withadhesive whites)和透明質酸(Transluceilt quality acid)],腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor-a)、轉化生長因子β1(trans

2、forminggrowth factor-betaβ1)的影響,進一步探討益氣化痰祛瘀膠囊治療本病的作用機制,為該藥廣泛應用臨床、申請專利提供實驗依據(jù)。
　　 方法:60只健康Wistar大鼠,體重240±20g,隨機將其分為六組:正常組、模型組、陽性對照組、益氣化痰祛瘀膠囊高劑量組、益氣化痰祛瘀膠囊中劑量組、益氣化痰祛瘀膠囊低劑量組,每組各10只。用10％水合氯醛腹腔注射麻醉,將大鼠仰臥位固定于實驗臺上,固定頭和四肢,切開頸部

3、皮膚,暴露氣管,正常組一次性氣管滴注等量生理鹽水,其余五組均采用經(jīng)氣管滴注博來霉素溶液建立肺纖維化大鼠模型,之后每日每只大鼠用青霉素8萬單位肌肉注射預防感染,共計3天。給藥過程中觀察動物的一般狀況:動物活動、體型、皮毛、攝食、糞便、精神狀態(tài)等。造模48h后,益氣化痰祛瘀膠囊高、中、低劑量組(5.625g/kg、2.812g/kg、1.40125/kg)灌胃給藥,每日一次,相當于人臨床日用劑量體重比例的20、10和5倍;陽性對照組用醋酸潑

4、尼松混懸液(0.25mg/kg)灌胃給藥,每日一次,相當于人臨床日用計量體重比例的7.5倍。正常組與模型組生理鹽水灌胃,每日一次,劑量均為10ml/kg·bw,上述六組給藥周期均為28天,次日晨起殺檢,并收集樣本,觀察對肺纖維化大鼠造模后的肺臟、胸腺和脾臟的影響,比較各組大鼠肺臟系數(shù)的變化情況;觀察各組動物雙肺外觀差別,取右肺中葉置于10%甲醛中固定,常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)4 u m厚石蠟切片,行HE染色,測定肺組織羥脯氨酸的含量,光鏡下觀

5、察大鼠肺組織病理形態(tài)學變化;化學發(fā)光法檢測血清學中的纖維四項,即Ⅲ型膠原(PCⅢ),Ⅳ型膠原(Ⅳ)、層粘連蛋白(LN)以及透明質酸(HA)的含量;采用ABC-ELISA法檢測大鼠血清細胞因子TGF-β1和TNF-a;
　　 結果：
　　 (1)一般狀況觀察:大鼠60只,在實驗期間均無死亡,正常組活潑好動,強壯肥碩,皮毛光亮,精神狀態(tài)良好;模型組表現(xiàn)出不同程度的咳喘(大約持續(xù)到7天左右),瞇眼,呆滯,精神差,造模型后第3天

6、有5只出現(xiàn)拱背蜷縮,皮毛晦暗,無光澤;陽性對照組實驗前幾天表現(xiàn)與模型組相似,治療1周后有所好轉,但食欲一般;中藥組開始表現(xiàn)與模型組相似,治療后明顯好轉,精神食欲較好。從體重上觀察,模型組體重無明顯增加,陽性對照組、益氣化痰祛瘀膠囊低、中、高劑量組體重均有明顯增加。與陽性對照組比較,高劑量組體重明顯增加,有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 (2)肺臟系數(shù)的比較:益氣化痰祛瘀膠囊5.625g/kg、2.8125g/kg、1.401

7、25/kg高、中、低三個劑量組造模給藥后,高、中、低劑量組、陽性對照組肺臟系數(shù)與模型組相比明顯降低,有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);陽性對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組肺臟系數(shù)無明顯變化,無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 (3)纖維四項比較:與模型組比較,陽性對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組Ⅲ型膠原(PCⅢ)、Ⅳ型膠原(Ⅳ-C)、層粘連蛋白(LN)、透明質酸酶(HA)均明顯降低,有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。與陽性對照

8、組比較,益氣化痰祛瘀膠囊高、中劑量組血清層粘連蛋白(LN)和透明質酸酶(HA)有所降低,但沒有統(tǒng)計學差異(P＜0.05).
　　 (4)病理結果顯示:模型組大鼠肺泡壁明顯增厚,肺彌漫性淤血出血灶性纖維化,肺泡上皮細胞變性,間質大面積纖維化,淋巴細胞含鐵血黃素細胞浸潤,大量淋巴細胞浸潤。陽性對照組肺泡壁增厚,大面積纖維化,間質淋巴細胞浸潤,上皮脫落變性、壞死,淋巴細胞含鐵血黃素。高劑量組大鼠肺泡壁增厚(灶性),間質輕度纖維化,淋巴

9、細胞浸潤,含鐵血黃素。中劑量組大鼠肺泡壁增厚,部分大鼠輕度間質纖維化。低劑量組大鼠肺泡壁增厚,有的破裂,大面積纖維化,淋巴細胞含鐵血黃色素細胞浸潤。益氣化痰祛瘀膠囊各治療組與模型組相比,肺組織病理改變均有不同程度改善,肺泡炎的程度差異具有顯著性(P＜0.05),由重到輕排序為模型組,低劑量組,陽性對照組,中劑量組,高劑量組,正常組。
　　 (5)TNF-a、TGF-β1的比較:模型組大鼠血清中TGF-β1的含量顯著高于正常組(P

10、＜0.01),益氣化痰祛瘀膠囊高、中、低劑量組TGF-β1的含量顯著低于模型組(P＜0.05).模型組、益氣化痰祛瘀膠囊低劑量組大鼠血清中TNF-a水平顯著高于正常組(P＜0.05);而益氣化痰祛瘀膠囊高、中劑量組大鼠血清中TNF-a水平與正常組差別不顯著(P＞0.05);益氣化痰祛瘀膠囊中劑量組血清中TNF-a水平低于陽性對照組,但沒有統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 (6)肺組織羥脯氨酸(HYP)的比較:與正常組比較:模型

11、組、陽性對照組羥脯氨酸值明顯升高,有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與模型組對照,正常組以及低、中、高劑量組羥脯氨酸值均有明顯降低,有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與陽性對照組比較,正常組、高劑量組羥脯氨酸值有明顯降低,有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結論：
　　 通過該課題的研究,我們可以得出以下結論:
　　 1.模型組大鼠肺組織HE切片病理形態(tài)變化與文獻報道一致,說明肺纖維化模型復制成功;
　　 2.

12、益氣化痰祛瘀膠囊對肺纖維化病理變化有明顯的改善作用,這一作用可能是通過以下途徑而實現(xiàn)的:通過抑制調節(jié)肺組織中氧化/抗氧化系統(tǒng)的平衡,減少細胞炎性介質的分泌,減輕氧自由基對肺組織結構的氧化損傷程度;抑制肺組織膠原蛋白的合成以及纖維四項的生成,從而減輕博萊霉素對大鼠的肺組織結構的破壞,減輕肺纖維化實變的程度;綜上所述,益氣化痰祛瘀膠囊對肺纖維化的發(fā)生和發(fā)展能夠起到有效的防治效果,對博萊霉素致大鼠肺纖維化有明顯的保護作用。
　　 3.