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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
觀察益氣化瘀化痰法(YHH)對(duì)肺纖維化大鼠肺組織結(jié)構(gòu)及腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、核因子-kB(nuclearfactor-kB,NF-kB)表達(dá)水平的影響,探討益氣化瘀化痰法改善肺纖維化作用及其作用機(jī)理。
方法:
1.造模及分組:同批次健康清潔級(jí)SD大鼠100只。采用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠。麻醉后,隨機(jī)選取90只大鼠氣管內(nèi)一次性灌注博萊霉
2、素建立肺纖維化大鼠模型;其余10只大鼠氣管內(nèi)一次性灌注等體積的生理鹽水,作為正常對(duì)照組(Z組)。造模后第28天,隨機(jī)選取2只大鼠處死,取肺組織行HE及Masson染色,參照Szapiel等的方法光鏡下觀察,確認(rèn)肺纖維化模型復(fù)制成功。大鼠造模成功后隨機(jī)分成6組:模型組(M組)、氫化可的松組(QK組)、益氣組(YQ組)、化瘀組(HY組)、化痰組(HT組)、益氣化瘀化痰組(YHH組)。
2.采用HE、Masson染色,運(yùn)用光鏡技術(shù)觀
3、察肺組織病理形態(tài)學(xué)變化。
3.運(yùn)用透射電鏡技術(shù)觀察肺組織超微結(jié)構(gòu)變化。
4.運(yùn)用免疫組化法檢測(cè)肺組織中TNF-α、NF-kB的表達(dá)水平情況。
5.統(tǒng)計(jì)方法:所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。組間比較及兩兩比較采用單因素方差分析及LSD-t法檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有顯著性。
結(jié)果:
1.肺組織病理形態(tài)學(xué)觀察:
(1)HE染色顯示
4、:Z組肺內(nèi)結(jié)構(gòu)清晰,無(wú)充血水腫、炎癥及纖維化表現(xiàn);M組肺組織結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重,肺泡腔萎陷,肺內(nèi)存在大片實(shí)變區(qū),纖維增生明顯;QK組、YQ組、HY組、HT組和YHH組的肺組織纖維化程度均較M組情況有所減輕,肺泡壁結(jié)構(gòu)基本正常,肺泡間隔纖維增生灶減少,肺泡內(nèi)未見(jiàn)明顯的滲出物淤積。
(2)Masson染色顯示:Z組肺內(nèi)結(jié)構(gòu)正常,肺泡間隔存在少量藍(lán)染膠原纖維;M組肺組織纖維化明顯,肺泡組織結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重,肺泡間隔大量藍(lán)染膠原纖維呈片狀積聚;
5、YQ組、HY組、HT組和YHH組膠原沉積量明顯減少,纖維化程度明顯減輕;QK組膠原沉積量較少,但減輕程度較各中藥治療組弱。
2.電鏡結(jié)果
Z組大鼠肺泡Ⅰ、Ⅱ型上皮細(xì)胞連接緊密,細(xì)胞間少量基質(zhì)和膠原纖維存在。M組Ⅰ型上皮細(xì)胞變性,部分脫落、崩解,Ⅱ型上皮細(xì)胞增生,膠原纖維在間質(zhì)大量堆積。QK組Ⅰ型上皮細(xì)胞基本正常,Ⅱ型上皮細(xì)胞增多不明顯,間質(zhì)內(nèi)有少量膠原纖維存在。YQ組、HY組、HT組和YHH組Ⅰ型上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本完整
6、,Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞增多不明顯,間質(zhì)成纖維細(xì)胞量減少,間質(zhì)內(nèi)仍有少量的膠原纖維堆積,以YHH組改善最明顯。
3.益氣化瘀化痰法對(duì)TNF-α、NF-kB的影響
(1)TNF-α的表達(dá):TNF-α在細(xì)胞胞漿中有陽(yáng)性表達(dá)。Z組肺組織中TNF-α未見(jiàn)棕黃色染色顆粒,無(wú)陽(yáng)性表達(dá);M組TNF-α陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)烈,表達(dá)廣泛,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯增多,細(xì)胞胞漿染色偶見(jiàn)深褐色,陽(yáng)性表達(dá)明顯高于Z組;QK組、YQ組、HY組、HT組和YHH組肺組織
7、細(xì)胞包漿中,棕黃色染色顆粒散在分布,以YHH組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目最少,但仍較Z組明顯增多。
(2)NF-kB的表達(dá):NF-kB在細(xì)胞胞漿和胞核中均有陽(yáng)性表達(dá),以胞核表達(dá)為主。Z組中未見(jiàn)棕黃色染色細(xì)胞顆粒存在,無(wú)陽(yáng)性表達(dá);M組、QK組和各中藥治療組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目均較Z組明顯增多;M組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目最多,表達(dá)最強(qiáng)烈。
(3)光密度值顯示:與Z組比較,M組TNF-α、NF-kB表達(dá)均有所升高(P<0.01);與M組比較,QK組、YQ
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