創(chuàng)傷弧菌膿毒癥大鼠肺組織TLR4-NF-KB炎癥信號通路表達的變化及血必凈的干預(yù).pdf

1、目的:
　　 觀察創(chuàng)傷弧菌膿毒癥大鼠肺組織TLR4、NF-κB p65的表達、早期炎細胞因子(TNF-α)、晚期炎癥因子(HMGB1)的水平、iNOS的活性及NO的含量,并觀察血必凈對其影響。
　　 方法:
　　 1.清潔級SD大鼠110只,雌雄各半,根據(jù)隨機數(shù)字表將大鼠分為正常組(n=10,A組),膿毒癥模型組(n=50,B組),血必凈干預(yù)組(n=50,C組),后兩組大鼠左后肢皮下注射創(chuàng)傷弧菌懸液(濃度為6×1

2、08cfu/ml,劑量為0.1ml/100g)。C組大鼠于染菌后30min腹腔注射血必凈注射液4ml/kg,每日2次。B組與C組分別在注射創(chuàng)傷弧菌后1h、6h、12h、24h、48h時活殺,各時相點動物數(shù)均為10只。無菌取部分肺組織于液氮中保存待用。
　　 2.觀察各組大鼠在染菌及藥物干預(yù)后行為學(xué)改變、肺濕干比及肺組織病理,并隨機取B組各個時間點大鼠1只全血做血培養(yǎng)。
　　 3.采用RT-PCR法檢測TLR4,NF-KB

3、 p65 mRNA的表達量,采用Western blot法測定HMGB1的蛋白表達量,采用ELISA法測定各組大鼠肺組織TNF-α的含量,采用試劑盒檢測iNOS的活性和NO的含量。
　　 4.實驗資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,應(yīng)用SPSS16.0進行處理組間比較采用方差分析,各組兩兩比較采用t檢驗。p<0.05為差異有顯著性意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.大鼠染菌3h后出現(xiàn)活動減少,進食飲水減少,6h后皮溫

4、升高,肢端及口唇發(fā)紺明顯,精神萎靡,反應(yīng)明顯變慢,呼吸急促,豎毛現(xiàn)象,隨著時間的推延,左后肢腫脹明顯,遠端暗紫色,不能承力,托著后肢行走,前述癥狀加重,12h與24h血培養(yǎng)均為陽性。經(jīng)血必凈干預(yù)后,大鼠出現(xiàn)類似膿毒癥組的表現(xiàn),但是時間延遲且癥狀有所減輕,正常大鼠無發(fā)熱,活潑自如,呼吸平穩(wěn),進食正常,無下肢腫脹。
　　 2.A組大鼠肺組織濕干比是(3.136±0.758)；與A組比較,B組創(chuàng)傷弧菌菌感染6 h(4.197±0.49

5、9)、12h(4.413±0.449)、24h(4.554±1.136)和48h(4.763±0.289)濕干比明顯增大(P<0.05),呈逐漸遞增趨勢；與B組比較,C組24 h(3.882±0.657)、48h(3.765±0.699)肺組織濕干比明顯減小(P<0.05),與A組比較,C組12h(3.847±0.596)、24 h(3.882±0.657)肺組織濕干比明顯增大(P<0.05)。
　　 3.A組大鼠肺組織TLR4

6、 mRNA的表達是(0.569±0.141)；與A組比較,B組創(chuàng)傷弧菌菌感染后6 h(1.213±0.433)、12 h(1.029±0.401)、24 h(0.992±0.283)肺組織TLR4 mRNA表達量均明顯增高(P<0.05)；與B組比較,C組6h肺組織TLR4mRNA表達量(0.737±0.224)明顯減少(P<0.05),與A組比較C組12h(1.122±0.809)明顯增高(P<0.05)。
　　 4.A組大鼠

7、肺組織NF-κB p65 mRNA的表達是(0.611±0.249)；與A組比較,B組創(chuàng)傷弧菌菌感染后6 h(1.406±0.687)與12 h(1.330±0.725)肺組織NF-κB p65 mRNA表達量均明顯增高(P<0.05)；與B組相同時間點比較,血必凈治療干預(yù)后,C組6h肺組織NF-κB p65 mRNA表達量(0.810±0.362)明顯減少(P<0.05),與A組比較,C組未明顯增高(P>0.05)。
　　 5

8、.A組大鼠肺組織HMGB1的蛋白表達是(0.594±0.190)；與A組比較,B組創(chuàng)傷弧菌菌感染6 h(1.408±0.567)后肺組織HMGB1表達量明顯增加(P<0.05),后逐漸增加,到24 h(2.415±1.064)肺組織HMGB1蛋白表達量達到峰值:與B組比較,血必凈治療干預(yù)后,C組24 h(1.440±0.451)肺組織HMGB1蛋白表達量明顯減少(P<0.05)；與A組比較,其中12 h(1.421±0.477)、24

9、h(1.440±0.451)、48 h(1.519±0.648)肺組織HMGB1蛋白表達量仍明顯增高(P<0.05)。
　　 6.A組大鼠肺組織TNF-α的含量是(237.59±26.56)；與A組比較,B組創(chuàng)傷弧菌菌感染1 h(297.92±41.68)、6 h(303.22±25.83)、12 h(364.28±61.66)和24 h(306.88±55.62)TNF-α的含量明顯增加(P<0.05),并于12 h達到峰值；

10、與B組比較,C組12 h(294.68±41.31)肺組織TNF-α的含量明顯減少(P<0.05),與A組比較,C組12h(294.68±41.31)、24 h(336.43±103.57)肺組織TNF-α的含量明顯增加(P<0.05)。
　　 7.A組大鼠肺組織iNOS的活性是(6.690±1.872)；與A組比較,B組創(chuàng)傷弧菌菌感染1 h(12.567±3.202)、6h(22.167±7.287)、12h(19.727±6

11、.230)和24h(14.369±3.782)iNOS的活性明顯增加(P<0.05),并于6h達到峰值；與B組相同時間點比較,C組6h(14.973±3.483)、12h(15.153±5.460)、24h(10.279±4.132)肺組織iNOS的活性明顯降低(P<0.05)。
　　 8.A組大鼠肺組織N0的含量是(4.94±1.480)；與A組比較,B組創(chuàng)傷弧菌菌感染1 h(14.534±3.817)、6h(31.515±7

12、.014)、12h(41.320±7.281)、24h(32.818±5.417)及48h(24.815±6.004)N0的含量明顯增加(P<0.05),并于12h達到峰值；與B組相同時間點比較,C組12h(30.932±5.190)、24 h(25.254±4.672)肺組織NO的含量明顯降低(P<0.05)。
　　 9.光鏡下觀察A組肺泡清晰,肺泡間隔較薄,未見充血及水腫,創(chuàng)傷弧菌感染48 h后,B組與A組比較肺內(nèi)血管充血明