siRNA靶向VEGF聯(lián)合紫杉醇對(duì)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞株的影響.pdf

1、研究目的：觀察siRNA靶向VEGF聯(lián)合紫杉醇對(duì)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞株的影響。
　　 研究方法：設(shè)計(jì)針對(duì)VEGF基因的小干擾RNA(siRNA)，采用陽離子脂質(zhì)體LipfectamineTM2000將siRNA片段導(dǎo)入Ishikawa細(xì)胞中；MTT法檢測(cè)不同濃度紫杉醇對(duì)細(xì)胞增殖的影響；將Ishikawa細(xì)胞分為空白對(duì)照組、siRNA-N轉(zhuǎn)染組、siRNA-VEGF轉(zhuǎn)染組、紫杉醇組、siRNA-VEGF轉(zhuǎn)染+紫杉醇組，采

2、用Realtime-PCR和Westernblotting分別檢測(cè)VEGF在mRNA和蛋白水平上表達(dá)的變化，用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)凋亡率及細(xì)胞周期分布情況；用Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞體外侵襲能力。
　　 研究結(jié)果：siRNA-VEGF轉(zhuǎn)染組、紫杉醇組和siRNA-VEGF轉(zhuǎn)染+紫杉醇組均可明顯下調(diào)Ishikawa細(xì)胞VEGF分子表達(dá)水平，抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)凋亡，降低細(xì)胞侵襲能力，且siRNA-VEGF轉(zhuǎn)染+紫杉醇組作用最顯著。

3、對(duì)細(xì)胞周期的影響表現(xiàn)為紫杉醇組和siRNA-VEGF轉(zhuǎn)染+紫杉醇組細(xì)胞阻滯在G2/M期；siRNA-VEGF轉(zhuǎn)染組細(xì)胞阻滯在G0/G1期。而作為對(duì)照的錯(cuò)義序列siRNA-N轉(zhuǎn)染組和空白對(duì)照組則沒有上述效應(yīng)。
　　 結(jié)論：靶向VEGF的siRNA可有效下調(diào)VEGF的表達(dá)；siRNA-VEGF轉(zhuǎn)染細(xì)胞聯(lián)合紫杉醇具有協(xié)同效應(yīng)，可顯著降低Ishikawa細(xì)胞VEGF的表達(dá)，抑制細(xì)胞增殖，降低細(xì)胞侵襲能力，將細(xì)胞周期阻滯于G2/M期促進(jìn)細(xì)