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1、氧化還原環(huán)境對(duì)機(jī)體細(xì)胞具有重要影響,特別是當(dāng)鈣釋放通道的氧化還原環(huán)境發(fā)生變化時(shí),會(huì)導(dǎo)致胞內(nèi)的鈣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和鈣調(diào)控機(jī)制發(fā)生變化,嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致諸多疾病。肌質(zhì)網(wǎng)(sarcoplasmic reticulum,SR)中的ryanodine receptor(RyR)是胞內(nèi)重要的鈣釋放通道之一,它對(duì)氧化還原環(huán)境異常敏感,是氧化脅迫主要作用靶點(diǎn)之一。前期工作證明不同的巰基氧化劑能有效影響骨骼肌SR的鈣調(diào)控機(jī)制,并發(fā)現(xiàn)在這些氧化劑與SR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生了
2、重要的氧化還原介質(zhì)--超氧自由基(superoxide,O2·-),但它在氧化劑對(duì)SR的調(diào)控過(guò)程中的作用目前尚不明朗。 本研究以提取的兔骨骼肌肌質(zhì)網(wǎng)(SR)囊泡和鈣釋放通道/ryanodine receptor(RyRl)為研究對(duì)象,考察了萘醌(naphthoquinon,NQ)和硒類(selenium,Se)化合物以及伴生的O2·-對(duì)骨骼肌型鈣釋放通道(RyRl)的調(diào)控作用,并初步探討這些氧化劑對(duì)RyRl門控的影響機(jī)制。
3、 實(shí)驗(yàn)利用紫外和熒光分光光度法定量檢測(cè)反應(yīng)伴生O2·-陰離子產(chǎn)率和通道蛋白自由巰基數(shù)量的變化。采用[3H]-ryanodine結(jié)合實(shí)驗(yàn)、SR囊泡鈣釋放動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)、單通道活性檢測(cè)以及通道蛋白的氧化還原電勢(shì)變化等實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了NQ類和Se類化合物對(duì)SR上RyRl活性和功能狀態(tài)的影響。SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳和蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)氧化劑導(dǎo)致的過(guò)氧化環(huán)境對(duì)SR上各蛋白的影響。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)所考察的巰基氧化劑對(duì)RyRl的活性和氧化還原電
4、勢(shì)具有雙相性影響,并伴有濃度依賴性的O2·-產(chǎn)生,同時(shí)通道的自由巰基數(shù)量隨氧化劑濃度增加而減少。另外,在高濃度氧化劑導(dǎo)致的過(guò)氧化環(huán)境下,與胞內(nèi)鈣轉(zhuǎn)運(yùn)和鈣平衡機(jī)制相關(guān)的RyRl、鈣泵等蛋白因巰基被氧化而發(fā)生錯(cuò)誤交聯(lián),對(duì)蛋白的功能造成嚴(yán)重?fù)p傷。超氧岐化酶(superoxide dismutase,SOD)可以有效降低上述影響。推測(cè)除了氧化劑的直接氧化作用外,伴生O2·-在這類氧化劑調(diào)控RyR1的機(jī)制中也扮演了重要角色。超氧作為胞內(nèi)信號(hào)分子,
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