氧化苦參堿對(duì)多發(fā)性骨髓瘤的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:多發(fā)骨髓瘤(multiplemyeloma，MM)是一種B細(xì)胞來(lái)源的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，近年來(lái)MM的治療取得了長(zhǎng)足的進(jìn)展，但因其復(fù)發(fā)、難治、耐藥的出現(xiàn)，迄今為止仍是一種不可治愈的疾病。氧化苦參堿(Oxymatrine，OMT)又名苦參素，是我國(guó)傳統(tǒng)中草藥苦參的主要活性成分，研究發(fā)現(xiàn)OMT具有抗腫瘤活性。因此，本研究意在探索OMT對(duì)MM的作用和機(jī)制。
　　方法:用不同濃度的OMT處理骨髓瘤細(xì)胞株(RPMI8226、U266、AR

2、P-1)和骨髓瘤原代細(xì)胞，MTT法檢測(cè)MM細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MM細(xì)胞株RPMI8226、U266細(xì)胞的凋亡率及細(xì)胞周期的改變;RT-PCR及western-blot方法檢測(cè)OMT處理后的骨髓瘤細(xì)胞Bcl-2家族蛋白和IAP家族蛋白成員的mRNA水平和蛋白水平的改變;western-blot法檢測(cè)不同濃度OMT處理后細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白caspase成員、周期相關(guān)蛋白、p-AKT、LC-3蛋白表達(dá)的改變。
　　結(jié)果:(1)

3、OMT抑制RPMI8226、U266、ARP-1細(xì)胞株和原代MM細(xì)胞的增殖并呈一定的量效關(guān)系。結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，OMT處理RPMI8226、U266、ARP-1細(xì)胞株24h后的IC50值分別為13.67mM，13.92mM，13.67mM;原代骨髓瘤細(xì)胞株24h的IC50為11.40mM
　　(2)用濃度為0、5、10、20mM的OMT處理骨髓瘤細(xì)胞株RPMI8226、U266細(xì)胞24h后，細(xì)胞凋亡率逐漸增多。10

4、mM的OMT作用24h后，RPMI8226、U266細(xì)胞的凋亡率已分別達(dá)到11.57％、12.8％(P＜0.05);當(dāng)濃度升高到20mM時(shí)，凋亡率升高到40.6％，60.1％，凋亡率顯著升高(P＜0.01)。OMT處理骨髓瘤細(xì)胞株RPMI8226、U266細(xì)胞24h后，活化caspase-3、caspase-9、裂解的PARP蛋白表達(dá)上調(diào);Survivin，HIAP蛋白表達(dá)受抑制;p-AKT蛋白表達(dá)受抑制。
　　(3)用濃度為5m

5、M的OMT處理骨髓瘤細(xì)胞株RPMI8226、U266細(xì)胞48h后，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果示G1期的細(xì)胞明顯增多(P＜0.05)。用濃度為0、5、10、20mM的OMT處理骨髓瘤細(xì)胞株RPMI8226、U266細(xì)胞24h后，western-blot結(jié)果顯示細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶CDK4、CDK6，細(xì)胞周期蛋白CyclinD1蛋白表達(dá)下調(diào)，P21蛋白表達(dá)上調(diào)。
　　(4)低濃度的OMT聯(lián)合低濃度的ADM，DXM有協(xié)同抗骨髓瘤的作用。
　

6、　(5)用濃度為0、5、10、20mM的OMT處理骨髓瘤細(xì)胞株RPMI8226、U266細(xì)胞24h后，LC3-Ⅱ的表達(dá)明顯增多，而加入5mM的自噬抑制劑3-MA后，MM細(xì)胞增殖受抑制更加明顯，凋亡增多(P＜0.05)。
　　結(jié)論:(1)OMT可抑制骨髓瘤細(xì)胞株細(xì)胞和原代MM細(xì)胞的增殖。
　　(2)OMT誘導(dǎo)MM細(xì)胞株RPMI8226、U266凋亡，可能與減少HIAP、Survivin蛋白表達(dá)，抑制AKT磷酸化有關(guān)。