大鼠骨髓血管內(nèi)皮祖細(xì)胞分離、培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化及鑒定.pdf

1、目的:探索大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)的分離、培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化及鑒定方法，為實(shí)驗(yàn)研究和臨床應(yīng)用搭建平臺。 方法:沖洗大鼠骨髓腔，梯度密度離心法獲得單個(gè)核細(xì)胞，內(nèi)皮系細(xì)胞專用培養(yǎng)液EGM-2MV培養(yǎng)，通過觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)、增殖活性、內(nèi)皮細(xì)胞系列標(biāo)志CD34、VEGFR-2、vWF免疫組化，祖細(xì)胞標(biāo)志CD133免疫熒光技術(shù)動態(tài)鑒定，激光共，聚焦顯微鏡觀察其攝取DIL-AC-LDL，結(jié)合FITC-Lectin-UEA-1實(shí)驗(yàn)，透射電鏡觀

2、察超微結(jié)構(gòu)和內(nèi)皮細(xì)胞特征性細(xì)胞器以及染色體核型分析進(jìn)行安全性評價(jià)。 結(jié)果:新分離的骨髓單個(gè)核細(xì)胞(BMMNCs)呈圓形，大小不一，48 h后部分細(xì)胞開始貼壁，形態(tài)有梭形、三角形、紡錘形或不規(guī)則形，4～8d出現(xiàn)細(xì)胞集落和細(xì)胞線狀排列，第9～11天接近融合，呈典型鵝卵石樣外觀。細(xì)胞生長曲線呈“S”形，8天和10天的增殖活性強(qiáng)于5天和14天。貼壁細(xì)胞CD34、VEGFR-2、vWF、CD133均表達(dá)陽性并呈動態(tài)變化，能夠攝取DIL-A