DkMYB和DkbHLH介入柿果實采后脫澀轉錄調控機制研究.pdf

1、柿（Diospyros kaki）原產于我國，現栽培品種以澀柿為主，其果實需經過采后脫澀才能食用，因此采后脫澀一直是柿生產與研究的重要主題。本論文以‘磨盤柿’為試材，利用高濃度CO2(95％)處理以加速柿果實采后脫澀，檢測了脫澀過程中的相關生理指標，克隆分離了DkMYB和DkbHLH轉錄因子，利用基因表達、染色體步移、雙熒光素酶等技術/體系，鑒別了介入柿果實采后脫澀的關鍵DkMYB轉錄因子，并初步明確了其作用靶標，該結果進一步豐富了柿果

2、實脫澀轉錄調控的機制。
　　本研究主要內容包括：⑴高濃度CO2處理(95％)的脫澀效應分析。研究發(fā)現高濃度CO2處理可快速降低‘磨盤柿’果實可溶性單寧含量，促使果實采后脫澀。伴隨脫澀過程，‘磨盤柿’果實的不溶性單寧、乙醇、乙醛等快速上升，因此，本研究從生理水平進一步明確了高濃度CO2的脫澀效應，并推測其通過誘導乙醛代謝，進而促使果實的可溶性單寧向不溶性單寧轉變。⑵柿果實DkMYB和DkbHLH克隆與表達分析。利用RNA-seq和R

3、ACE技術分離到4個DkMYB和2個DkbHLH成員，并分別命名為DkMYB5-8和DkbHLH1-2。通過序列比對和進化樹聚類，明確了DkMYB和DkbHLH分別具有典型的MYB和bHLH結構域。基因表達結果分析表明，除DkbHLH2外，其他5個成員均在CO2脫澀處理過程中受顯著誘導，表現為與脫澀進程顯著正相關關系。⑶介入柿果實脫澀轉錄調控的DkMYB6的鑒別及作用途徑分析。利用雙熒光素酶實驗，發(fā)現6個轉錄因子中，僅DkMYB6可顯著

4、增強脫澀關鍵靶標基因DkPDC2和DkPDC3的啟動子活性。進一步研究明確了，DkMYB6可誘導脫澀相關的DkERF基因（DkERF9、DkERF19和DkERF22）的啟動子活性，但DkMYB6與上述DkERF間無顯著協同增效效應。該結果表明，DkMYB6參與了柿果實采后脫澀的轉錄調控，不僅可激活脫澀相關靶標基因（DkPDC2和DkPDC3），還可調控前期鑒別的脫澀相關DkERF轉錄因子。該結果進一步豐富了柿果實采后脫澀的轉錄調控機制