rAAV2-hFⅨ無創(chuàng)途徑治療血友病B的臨床研究.pdf

1、血友病B是一種FIX基因缺陷所致的出血性疾病。雖然通過肌肉注射、門靜脈或肝動脈灌注重組腺相關(guān)病毒載體等方法，在動物模型上取得長期糾正出血癥狀的療效，但是以上給藥方式均為有創(chuàng)性。而以腸上皮細胞為靶細胞，通過灌腸給藥，則可避免有創(chuàng)性。本實驗室通過結(jié)腸灌注rAAV2/hFIX載體對血友病B小鼠進行基因治療實驗，已經(jīng)建立了無創(chuàng)給藥的臨床試驗基礎(chǔ)。 為了檢測通過結(jié)腸灌注rAAV2/hFIX載體治療血友病B的有效性和安全性，選擇了兩位血友病

2、B患者，在纖維結(jié)腸鏡引導(dǎo)下結(jié)腸灌注rAAV2/hFIX載體，觀察其臨床癥狀和體征變化，留取患者全血、血漿、唾液、尿液。采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測患者血漿和糞便中抗AAV2抗體以及FIX抗原；凝血活性一期法檢測FIX活性；改進型Bethesda法檢測血漿中的中和抑制性抗體(抗FIX抗體)；采用PCR技術(shù)檢測rAAV2/hFIX載體在體液中的分布情況。 兩例患者結(jié)腸灌注劑量分別為3×10<'12>vg/kg，8×10<'

3、12>vg/kg，在灌注后的一個月中，均未出現(xiàn)胃腸道及全身不適癥狀和異常體征。血漿中的FⅨ抗原最高濃度分別達6μg/ml和4.69μg/ml，其活性分別為2.27％和2.63％，可維持一周左右。結(jié)腸灌注rAAV2/hFIX載體后，兩位患者體內(nèi)均未檢測到抗FIX抗體升高。在尿液、唾液、血液中均未檢測到rAAV2/hFIX載體基因。但是抗AAV2抗體相對濃度隨灌注劑量增加而增加，在接受高劑量灌注的患者體內(nèi)可以檢測到高濃度的抗AAV2抗體，在