中藥雞爪蓮對(duì)HIV新靶點(diǎn)的作用及其有效成分的研究.pdf

1、艾滋病(Acquiredimmunedeficiencysyndrome，AIDS)是由人免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirus，HIV)引起的傳染病，自從1981年第一例病例報(bào)道以來(lái)，全世界已有超過(guò)7000萬(wàn)的人口感染了該種病毒，其中超過(guò)三分之一死于該種疾病。 目前已獲準(zhǔn)上市的HIV感染治療藥物主要以病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶和蛋白酶為靶點(diǎn)，具有易產(chǎn)生耐藥性、毒副作用強(qiáng)以及價(jià)格貴的缺點(diǎn)。因此目前臨床上主要采用高

2、效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART療法)，該療法是由兩個(gè)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和一個(gè)蛋白酶抑制劑所組成，雖然這兩類(lèi)制劑能抑制病毒復(fù)制，延緩發(fā)病，延長(zhǎng)生命，但并不能消除病毒，毒副作用也較大，長(zhǎng)期使用仍然易產(chǎn)生耐藥性，需要不斷換藥，且治療價(jià)格貴，難以滿足治療的需要。所以，基于上述兩個(gè)靶點(diǎn)藥物及其合并使用的缺點(diǎn)，尋找作用于HIV新靶點(diǎn)的藥物就具有特別重要的意義。 本研究先以體外藥效學(xué)的檢測(cè)手段確證了中藥雞爪蓮的活性提取物，繼而以BIA(Biomo

3、lecularInteractionAnalysis)技術(shù)對(duì)樣品結(jié)合HIVgp41的檢測(cè)結(jié)果為指導(dǎo)，對(duì)目標(biāo)的天然產(chǎn)物雞爪蓮進(jìn)行了活性追蹤分離，有針對(duì)性地從天然產(chǎn)物雞爪蓮中提取、分離和純化有效成分，并通過(guò)波譜學(xué)的手段對(duì)有效單體化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步鑒定。藥物提取和分離部分的主要實(shí)驗(yàn)方法包括薄層層析(Thin-LayerChromatography，TLC)、高效液相色譜(HighPerformanceLiquidChromatograph

4、y，HPLC)技術(shù)和柱層析(ColumnChromatography)，藥效學(xué)檢測(cè)的方法主要包括BIA結(jié)合靶蛋白的檢測(cè)技術(shù)及體外細(xì)胞培養(yǎng)的生物活性檢測(cè)，其中細(xì)胞培養(yǎng)使用的細(xì)胞株為MT-4細(xì)胞，病毒株為HIV-1ⅢB。通過(guò)實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論：雞爪蓮的水提取物在MT-4細(xì)胞中比不同濃度的乙醇提取物抗HIV-1作用更好；進(jìn)一步分離得到的粗提物A1和B1經(jīng)BIA技術(shù)檢測(cè)均與HIV-1的跨膜蛋白gp41有較好的結(jié)合；粗提物A1在經(jīng)進(jìn)一步純化處理后得到的