GPX3基因甲基化在白血病發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、目的：谷胱甘肽過(guò)氧化物酶3（Glutathione Peroxidase3，GPX3）基因在很多腫瘤細(xì)胞中啟動(dòng)子區(qū)域異常甲基化而低表達(dá)，但 GPX3基因甲基化在白血病細(xì)胞中的相關(guān)研究甚少。本研究探討 GPX3基因甲基化在白血病發(fā)生發(fā)展中可能的作用。
　　方法：將4種白血病細(xì)胞株CCRF-CEM、Molt-4、HL-60、THP-1進(jìn)行體外培養(yǎng)，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連反應(yīng)及甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)觀(guān)察 GPX3的信使RNA（mRNA）的

2、表達(dá)和甲基化程度，用免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法對(duì)四種白血病細(xì)胞進(jìn)行染色，觀(guān)察GPX3蛋白表達(dá)情況。將四種細(xì)胞株各自分為對(duì)照組、單用去甲基化藥物組（5-氮雜-2'-脫氧胞苷,5-aza-dc）、單用組氨酸去乙?；敢种苿┙M和聯(lián)合用藥組（曲古抑菌素 A，TSA），利用定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)比較各組的GPX3表達(dá)水平。抑制THP-1細(xì)胞的GPX3基因表達(dá)，觀(guān)察白血病細(xì)胞增殖與克隆能力的變化。
　　結(jié)果：在4種白血病細(xì)胞株中，GPX3的mRNA及

3、蛋白表達(dá)水平均低。GPX3基因在白血病細(xì)胞株中處于完全甲基化或部分甲基化狀態(tài)。單用去甲基化藥物組的GPX3基因的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組（P＜0.01）；單用組氨酸去乙?；敢种苿┙M的GPX3基因的表達(dá)水平則與對(duì)照組無(wú)明顯差異，其差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。用短發(fā)夾RNA轉(zhuǎn)染法抑制THP-1的GPX3基因表達(dá)，可使THP-1細(xì)胞的增殖與克隆能力明顯高于對(duì)照組（Mock組），其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。
　　結(jié)論：在白血病細(xì)胞中，G