CaMKII-TAK1-p38途徑在神經干細胞凋亡中的作用.pdf

1、目的： 研究CaMKⅡ、TAK1、p38、細胞色素C在RA誘導神經干細胞凋亡過程中的作用，試圖揭示RA通過MAPK途徑引起神經干細胞凋亡的可能機制，為進一步探討RA誘導神經干細胞凋亡的機制以及凋亡與神經管畸形之間的聯(lián)系提供理論依據。 方法： RA刺激神經干細胞后，Western blot技術觀察CaMKⅡ、TAK1、p38磷酸化狀態(tài)和細胞質中細胞色素C的變化。在給予CaMKⅡ抑制劑KN-93后，用RA刺激神經干細

2、胞，應用流式細胞術及DNA Ladder檢測細胞凋亡，Western blot技術觀察CaMKⅡ、TAK1和p38的變化。 結果： 1．RA可以增加CaMKⅡ，TAK1和p38的磷酸化 用16μM的RA刺激神經干細胞，分別設定不同的時間點，Western blot免疫印跡，結果顯示磷酸化的CaMKⅡ在RA作用后5min開始升高，10min達到高峰。不同的時間點檢測顯示RA也可以增加TAK1和p38的磷酸化，其達到

3、峰值的時間分別為20min，40min。 2．RA可激活CaMKⅡ-TAK1-p38途徑 RA刺激后不同時間點進行Western blot分析，TAK1和p38達到峰值的時間均在CaMKⅡ之后，表明CaMKⅡ是磷酸化的TAK1和p38的上游分子。KN-93抑制CaMKⅡ基因表達之后，再用RA刺激，Western blot檢測磷酸化的TAK1和p38的變化，結果發(fā)現(xiàn)使用KN-93顯著減弱了RA引起的TAK1和p38磷酸化。

4、這些結果表明RA激活CaMKⅡ-TAK1-p38途徑。 3．RA誘導神經干細胞發(fā)生凋亡是通過CaMKⅡ引起線粒體途徑實現(xiàn) 用CaMKⅡ的抑制劑KN-93處理神經干細胞后，應用流式細胞儀和DNA梯狀條帶的凝膠電泳檢測，表明KN-93可明顯的降低RA引起的凋亡。同時應用Western blot檢測RA誘導神經干細胞凋亡過程中細胞色素C的變化，結果發(fā)現(xiàn)在細胞質中有細胞色素C的釋放。這些結果表明RA誘導神經干細胞發(fā)生凋亡是由Ca