鞘磷脂合成酶(SMS)異常表達(dá)對(duì)Caco-2細(xì)胞中藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)和功能的影響.pdf

1、鞘磷脂合成酶SMS(Sphingomyelin synthase)是哺乳動(dòng)物鞘磷脂(Sphingomyelin，SM)生物合成途徑中的最后一個(gè)酶，它主要有SMS1和SMS2兩個(gè)亞型，其中SMS1位于在順面高爾基體上，SMS2主要位于細(xì)胞膜上。SMS與質(zhì)膜結(jié)構(gòu)、功能以及膜蛋白的表達(dá)與定位密切相關(guān)。藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體，是一個(gè)特殊的膜蛋白家族，在藥物代謝中發(fā)揮重要作用，其異常表達(dá)與一些疾病的發(fā)生有關(guān)。SMS是否影響藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)與功能，通過(guò)怎樣的分

2、子機(jī)制，是我們關(guān)注的課題。我們以人類結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2(colon cancer cell)為對(duì)象，分別采用基因下調(diào)和過(guò)表達(dá)的方式，輔以RT-PCR，western blot和HPLC等手段，研究SMS對(duì)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)與功能的影響。首先，我們用siRNA干擾Caco-2細(xì)胞中SMS1或SMS2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)P-gp和MRP2的mRNA和蛋白水平的表達(dá)明顯降低，并且它們的功能也出現(xiàn)相應(yīng)下調(diào)，而其它藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)則沒(méi)有明顯變化。其次

3、，我們構(gòu)建了穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SMS1的Caco-2細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)SMS1的過(guò)表達(dá)引起P-gp和MRP2表達(dá)的顯著增加，調(diào)控二者表達(dá)的核受體轉(zhuǎn)錄因子hPXR的mRNA水平的顯著升高，以及參與hPXR調(diào)控的信號(hào)通路JAK-2(janus proteintyrosine kinase2)、ERK(extracellular signal regulated kinases)的磷酸化水平的上調(diào)。推測(cè)，在SMS1過(guò)表達(dá)的Caco-2細(xì)胞中，p-ERK，p