姚江水系中華鱉種質(zhì)特征研究.pdf

1、中華鱉具有肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)豐富等特點(diǎn)，自古以來都是我國傳統(tǒng)食療的滋補(bǔ)佳品。隨著人們物質(zhì)生活水平的不斷提高，海內(nèi)外市場對中華鱉的需求也越來越大，加速對中華鱉的人工繁殖和養(yǎng)殖已成為一個(gè)必然的趨勢。近年來，隨著生產(chǎn)中一些養(yǎng)殖戶的不規(guī)范引種、倒種，不注重品種的培育，導(dǎo)致中華鱉的品種混亂，遺傳多樣性降低。種質(zhì)是產(chǎn)業(yè)的源頭，是物種生命延續(xù)和種群繁衍的根本保證。為合理開發(fā)與保護(hù)中華鱉的種質(zhì)資源，本研究以浙江省寧波市姚江流域的中華鱉群體為主要研究對象，首

2、先對其染色體的制備方法進(jìn)行了探究，并對核型及G-帶做了準(zhǔn)確的分析，旨在為中華鱉的性別研究及人工繁殖提供理論依據(jù)；然后采用RAPD及DNA條形碼的方法，對姚江群體及其他5個(gè)地理群體（黃河群體、清溪花鱉、日本群體、太湖群體及清溪烏鱉）的中華鱉進(jìn)行了遺傳多樣性分析，以期能對不同地理群體的中華鱉進(jìn)行準(zhǔn)確地鑒別。具體結(jié)果如下：
　　在染色體核型分析方面，本研究發(fā)現(xiàn)，秋水仙素的注射量對中華鱉的染色體制備有很大的影響，腹腔注射1μg/g（體重）

3、秋水仙素，作用時(shí)間為1h比較適合中華鱉染色體標(biāo)本的制備。用熒光顯微鏡和Photoshop CS3軟件對染色體配對分析，按LEVAN等標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行染色體分類發(fā)現(xiàn)，中華鱉存在異形性染色體，其核型公式為2n=66=4m+4st+34sm+22T+ZZ/ZW；雄性的臂數(shù)為104，雌性為105；對比發(fā)現(xiàn)，雌雄染色體的相對長度差異不大。33對染色體中，1～6號為大染色體，其余均為小型染色體。用胰蛋白酶處理法制備了染色體G帶，并繪制了1～6號染色體的G帶

4、模型圖。
　　在RAPD分析上，本研究采用篩選出的9條隨機(jī)引物對中華鱉6個(gè)不同地理群體的112個(gè)個(gè)體進(jìn)行RAPD擴(kuò)增分析。結(jié)果表明，9條10bp的隨機(jī)引物在6個(gè)中華鱉群體中共擴(kuò)增出156條帶，其中多態(tài)性條帶（P）為142（91.03％），僅14條帶在6個(gè)群體中穩(wěn)定出現(xiàn)，各群體的多態(tài)位點(diǎn)比例（P）在39.34～75.00%之間，Nei’s基因多樣性指數(shù)在0.1144～0.2643之間，Shannon信息指數(shù)在0.1684～0.393

5、4之間，各項(xiàng)遺傳多樣性指標(biāo)中，姚江群體均處于最高水平，表明姚江群體具有較高的遺傳多樣性；在親緣關(guān)系中，姚江群體與清溪花鱉間的關(guān)系最近，與黃河群體最遠(yuǎn)；基于電泳條帶，未發(fā)現(xiàn)用于區(qū)分不同群體的特異性標(biāo)記，但基于個(gè)體遺傳距離構(gòu)建的分子系統(tǒng)樹，不同群體中華鱉在進(jìn)化樹上的聚類具有種的特性，因此可以通過進(jìn)化樹分析將各個(gè)群體區(qū)分開。
　　在DNA條形碼鑒別方面，根據(jù)已有的中華鱉COI基因序列片段，本研究設(shè)計(jì)了特異性引物進(jìn)行中間片段、3’和5’R

6、ACE反應(yīng)，得到了中華鱉COI基因全長為1635bp的序列，并以此設(shè)計(jì)用于DNA條形碼分析的通用引物，對中華鱉6個(gè)地理群體的111個(gè)體及鱉科不同屬間進(jìn)行遺傳多樣性分析。結(jié)果表明，從1534bp的序列中，共檢測到保守位點(diǎn)（C）928個(gè)，變異位點(diǎn)（V）606個(gè)，簡約信息位點(diǎn)（Pi）337個(gè)，自裔位點(diǎn)（S）269個(gè)，各堿基平均含量為A=30.10%、T=30.27%、C=23.41%、G=16.22%，A+T的含量（60.37%）明顯高于C+

7、G的含量（39.63%）；總?cè)后w的單倍型多樣性指數(shù)（H）為0.972，堿基多樣性指數(shù)（Pi）為0.0171，表明各群體均具有較高的遺傳多樣性；群體遺傳距離在0.0203～0.0417之間，群體內(nèi)平均遺傳距離在0.0113～0.0338之間，種間與種內(nèi)的遺傳距離沒有形成有效的條形碼間隙，個(gè)體NJ樹上，各群體間的個(gè)體并沒有形成有效的分支。而在對鱉科不同屬間的分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，屬間及屬內(nèi)遺傳距離形成了明顯的差異間隙，在NJ樹上，不同鱉按照屬的特性分