同時(shí)檢測(cè)禽畜可食組織中三類(lèi)(9種)獸藥膜免疫芯片的研發(fā).pdf

1、獸藥殘留是指給畜禽等動(dòng)物不合理地用藥所致藥物或化學(xué)物的原形、代謝產(chǎn)物和雜質(zhì)蓄積或儲(chǔ)存于動(dòng)物細(xì)胞、組織、器官以及可食性產(chǎn)品中的現(xiàn)象。獸藥殘留的超標(biāo)不僅會(huì)直接危害人體健康，而且還會(huì)導(dǎo)致微生物耐藥性增強(qiáng)、生態(tài)環(huán)境毒性等一系列危害。同時(shí)，獸藥殘留相關(guān)的食品安全問(wèn)題的頻發(fā)，也使其成為國(guó)際貿(mào)易中的非關(guān)稅性貿(mào)易壁皇，引起了國(guó)際社會(huì)和各國(guó)政府的高度重視，紛紛采取措施對(duì)獸藥殘留進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)控。因此，發(fā)展快速、簡(jiǎn)易、高靈敏、高通量的獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)已成為當(dāng)前

2、的迫切需要。
　　本文研宄并建立了同時(shí)檢測(cè)常見(jiàn)的三類(lèi)（9種）獸藥一慶大霉素（GM)、磺胺類(lèi)藥物（SAs)和氟喹諾酮類(lèi)藥物（FQNs)的膜免疫芯片分析法，以分析牛奶和豬肝中的獸藥殘留。該方法高通量、操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)時(shí)間短、準(zhǔn)確，檢測(cè)結(jié)果與HPLC或市售ELISA的結(jié)果一致，在小分子有毒有害物質(zhì)的殘留分析領(lǐng)域顯示了較好的應(yīng)用潛力。主要研宄內(nèi)容如下：
　　1.檢測(cè)抗原GM-OVA和CPFX-BSA的化學(xué)合成
　　采用EDC法和

3、戊二醛一步法分別合成了檢測(cè)抗原GM-OVA和CPFX-BSA，經(jīng)Nanodrop超微量分光光度計(jì)測(cè)定GM-OVA和CPFX-BSA抗原蛋白濃度，得出GM-OVA和CPFX-BSA抗原蛋白濃度分別為1.0mg/mL和1.05mg/mL。
　　2.分別檢測(cè)豬肝和牛奶中SAs、GM和FQNs的Ic-ELISA的建立
　　2.1檢測(cè)豬肝和牛奶中SAs的Ic-ELISA的建立
　　經(jīng)棋盤(pán)滴定確定了方法的最佳SDZ-BSA檢測(cè)抗原

4、的包被濃度為6μg/mL，抗SDZ單克隆抗體的工作濃度為1:16000，IC50為0.063μg/L，線性范圍為0.016～0.202μg/L，牛奶和豬肝樣品中SDZ/SMR/SM2/SMDZ加標(biāo)回收率在63.0％～117.9%之間，與SMR、SM2、SMDZ的交叉反應(yīng)率分別為56.3%、50.0%、52.1%，與其他常見(jiàn)抗菌藥物未見(jiàn)明顯的交叉反應(yīng)。
　　2.2檢測(cè)豬肝和牛奶中GM的Ic-ELISA的建立
　　經(jīng)棋盤(pán)滴定確定

5、，該方法的最佳GM-OVA檢測(cè)抗原的包被濃度為1μg/mL，抗GM單克隆抗體的工作濃度為1:8000，IC50為0.996μg/L，檢測(cè)范圍為0.287～2.473μg/L，回收率在70.9～94.4%，與其他常見(jiàn)抗菌藥物未見(jiàn)明顯的交叉反應(yīng)。
　　2.3檢測(cè)豬肝和牛奶中FQNs的Ic-ELISA的建立
　　經(jīng)棋盤(pán)滴定確定，最佳CPFX-BSA檢測(cè)抗原的包被濃度為4μg/mL，抗CPFX單克隆抗體的工作濃度為1:8000，IC

6、50為0.346μg/L，檢測(cè)范圍為0.099～0.831μg/L，回收率在60.5～120.4%，與NFLX、ENLX、DFLX的交叉反應(yīng)率分別為432%、20%、15.5%，與其他常見(jiàn)抗菌藥物未見(jiàn)明顯的交叉反應(yīng)。
　　3.同時(shí)檢測(cè)三類(lèi)（9種）獸藥的膜免疫芯片分析法的建立
　　依據(jù)Ic-ELISA原理，將檢測(cè)抗原固定于PVDF上，通過(guò)優(yōu)化包被抗原濃度和抗體的工作濃度，建立了可同時(shí)檢測(cè)三類(lèi)（9種）獸藥的膜免疫芯片分析法，以檢