熱穩(wěn)定性β-半乳糖苷酶工程菌構(gòu)建及其培養(yǎng)條件優(yōu)化.pdf

1、　　本研究利用基因重組技術(shù)構(gòu)建熱穩(wěn)定性β-半乳糖苷酶基因工程菌，并對(duì)篩選獲得的工程菌優(yōu)化培養(yǎng)條件。通過(guò)試驗(yàn)獲得如下主要結(jié)果：1.將枯草芽孢桿菌生孢子早期因子spoOA基因整合載體pGJ09和pGJl6分別以雙交叉和單交叉同源重組方式整合到枯草芽孢桿菌野生株1A747中，得到spoOA基因突變株BGJ09-5和BGJ16-3。通過(guò)PCR、酶切檢測(cè)BGJ09-5的spoOA基因完全敲除，生孢子培養(yǎng)結(jié)果完全喪失生孢子能力，并且BGJ09-5生

2、長(zhǎng)速度受到嚴(yán)重抑制，而B(niǎo)GJl6-3是在spoOA基因位點(diǎn)插入一段新霉素抗性基因，其仍具有生孢子能力，但相對(duì)陰性對(duì)照野生株1A747生孢子速度慢。2.熱穩(wěn)定性β-半乳糖苷酶基因表達(dá)載體pGJ222電轉(zhuǎn)化野生菌1A747、突變株BGJl6-3和BGJ09-5，得到轉(zhuǎn)化子BGJ222和BGJ222-16。對(duì)BGJ222和BGJ222-16表達(dá)β-半乳糖苷酶的情況進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)BGJ222比突變株BGJ222-16表達(dá)β-半乳糖苷酶的能力強(qiáng)。

3、3.將獲得的BGJ222進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，篩選出最佳培養(yǎng)基配方及發(fā)酵工藝參數(shù)為：1﹪蛋白胨(Trypton)、1﹪酵母抽提物(Yeastextract)、1﹪山梨醇(D-Soribitol)、1﹪乳糖(Lactose)、1.3﹪Na2HPO4·12H2O、1﹪NaH2PO4·2H2O，滅菌前調(diào)PH值為6.6；發(fā)酵工藝參數(shù)為250ml三角瓶裝液量30ml、接種量2﹪、溫度37℃、轉(zhuǎn)速225rpm/min。4.由于表達(dá)載體是枯草芽孢桿菌麥芽糖啟