膽固醇-半乳糖苷的放大工藝及其制劑的穩(wěn)定性考察.pdf

1、目的:
　　膽固醇-半乳糖苷是本實(shí)驗(yàn)室利用非水相酶促合成法研制的新型配體，可以與磷脂制成配體脂質(zhì)體納米粒，研究發(fā)現(xiàn)，其脂質(zhì)體的肝細(xì)胞攝取率相較于普通脂質(zhì)體增加了2-5倍。目前實(shí)驗(yàn)室已成功制成了膽固醇-半乳糖苷介導(dǎo)的藥物脂質(zhì)體。但是目前對膽固醇-半乳糖苷的合成還處于小試試驗(yàn)階段，很多參數(shù)都不完善，因此本文對膽固醇-半乳糖苷的酶促合成工藝技術(shù)進(jìn)行了放大，通過放大試驗(yàn)完善了其合成純化的工藝路線。并將放大后的膽固醇-半乳糖苷用于制備紫杉醇

2、配體脂質(zhì)體;之后對膽固醇-半乳糖苷介導(dǎo)的紫杉醇配體脂質(zhì)體制劑進(jìn)行了穩(wěn)定性試驗(yàn)、制劑配伍試驗(yàn)以及急性毒性研究。
　　方法:
　　1.在對膽固醇-半乳糖苷進(jìn)行中試放大的過程中，使用逐步放大的方法，先將其放大至小試時的5倍，在5倍條件下以產(chǎn)率及純度作為評判指標(biāo)，對膽固醇-半乳糖苷合成及純化過程中的處方工藝流程進(jìn)行優(yōu)化，使最終產(chǎn)物的產(chǎn)率＞90％，純度＞95％，然后使用優(yōu)化后的處方工藝將反應(yīng)放大至小試時的50倍，方法同上。
　　

3、2.以紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)品作為外標(biāo)，在HPLC條件下，建立紫杉醇配體脂質(zhì)體含量測定的方法學(xué)。
　　3.以紫杉醇脂質(zhì)體的凍干粉作為研究對象，分別進(jìn)行高溫(40℃)、高濕(25℃，RH70％±5％)、強(qiáng)光(4500±500lx)穩(wěn)定性試驗(yàn)，試驗(yàn)時長設(shè)置為10天，于第0、5、10天取樣，測包封率、Zeta電位、粒徑、pH值、氧化指數(shù)等指標(biāo);并考察其加速(30±2℃，RH65％±5％)穩(wěn)定性，試驗(yàn)時長設(shè)置為6個月，于第0、1、2、3、6個月取樣，

4、測定粒徑、電位、包封率、pH值、氧化指數(shù)等指標(biāo)。
　　4.以紫杉醇脂質(zhì)體的凍干粉作為研究對象，使用0.9％氯化鈉注射液、5％葡萄糖注射液、10％氯化鈉注射液、50％葡萄糖注射液四種輸液分別與其配伍，試驗(yàn)時長設(shè)置為24h，于0、4、8、12、24h取樣測定粒徑、電位、包封率、pH值、氧化指數(shù)等指標(biāo)。
　　5.使用單次給藥注射，以紫杉醇配體脂質(zhì)體凍干粉作為研究對象，普通紫杉醇脂質(zhì)體凍干粉作為對照，使用0.9％氯化鈉注射液溶解藥物

5、，試驗(yàn)動物選用SPF級小鼠，首先通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定兩種脂質(zhì)體的最大安全劑量和最小致死劑量，然后根據(jù)公示r=n-1√a/b（r為兩劑量組時間的比值，n為預(yù)分組數(shù)，a最小致死劑量，b為最大安全劑量）
　　確定最終實(shí)驗(yàn)分組以及每組注射劑量，注射后放置14天，觀察小鼠死亡情況并記錄，計算兩種脂質(zhì)體的LD50，并進(jìn)行比較。
　　結(jié)果:
　　1.在將膽固醇-半乳糖苷放大至50倍后，通過對乳糖醇和膽固醇-單乙烯酯的摩爾比、酶的種類及用量

6、、混合溶劑的比例等因素單因素考察以及正交試驗(yàn)，最終得到的產(chǎn)物產(chǎn)率約為96％，純度約為95％。
　　2.在對HPLC法測定紫杉醇配體脂質(zhì)體內(nèi)藥物含量進(jìn)行方法學(xué)考察時，結(jié)果顯示，脂質(zhì)體內(nèi)的其他物質(zhì)不影響紫杉醇的含量測定，精密度、回收率等顯示結(jié)果良好。
　　3.穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明，脂質(zhì)體在高溫、高濕、強(qiáng)光照射條件下包封率、粒徑、電位等指標(biāo)均未產(chǎn)生顯著變化;加速穩(wěn)定性試驗(yàn)中脂質(zhì)體在3個月之內(nèi)，包封率、粒徑、電位等指標(biāo)均未產(chǎn)生顯著變化

7、，至6個月時包封率等出現(xiàn)較大下降。
　　4.配伍穩(wěn)定性顯示，脂質(zhì)體凍干粉在于0.9％氯化鈉注射液、5％葡萄糖注射液、10％氯化鈉注射液、50％葡萄糖注射液四種輸液分別配伍后，在24h內(nèi)包封率、粒徑、電位等指標(biāo)均未產(chǎn)生顯著變化。
　　5.急性毒性預(yù)試驗(yàn)中，得到了兩種脂質(zhì)體對小鼠的近似100％死亡的最小致死量和0％死亡的最大耐受量，普通脂質(zhì)體的為30mg/ml和20mg/ml，紫杉醇配體脂質(zhì)體的為80mg/ml和40mg/ml，

8、正式試驗(yàn)階段，通過觀察和記錄小鼠的死亡情況，最終計算得兩種脂質(zhì)體的LD50，普通紫杉醇脂質(zhì)體LD5為23.454mg/ml，其95％可信度區(qū)間范圍在22.109-24.788mg/ml;紫杉醇配體脂質(zhì)體的LD50為63.455 mg/ml，其95％可信度區(qū)間范圍在57.544-71.872mg/ml。
　　結(jié)論:
　　1.膽固醇-半乳糖苷在放大到50倍后產(chǎn)率高，純度好，穩(wěn)定性優(yōu)良，可以用于批量試制。
　　2.用于測定紫

9、杉醇配體脂質(zhì)體的藥物含量的HPLC法，準(zhǔn)確性高，專屬性強(qiáng)，靈敏度好，可以在接下來的試驗(yàn)中用于檢測紫杉醇配體脂質(zhì)體中紫杉醇藥物的含量。
　　3.穩(wěn)定性試驗(yàn)表明，在各種極端條件下，短時間內(nèi)脂質(zhì)體都可以保持良好的穩(wěn)定性，但是正常情況下不宜貯存超過3個月，而且作為注射劑時，可以很好地與多種輸液配伍，是臨床上理想的新型制劑。
　　4.配伍穩(wěn)定性表明，紫杉醇配體脂質(zhì)體作為注射劑時，可以很好地與多種輸液配伍，是臨床上理想的新型制劑。