紅細胞羰基應激及谷胱甘肽的拮抗作用.pdf

1、自由基氧化和非酶糖基化是體內(nèi)兩大類物質(zhì)能量代謝過程中必然發(fā)生的生化副反應。它們均會產(chǎn)生一系列的毒性羰基類物質(zhì)，其中丙二醛(MDA)是最主要的一種。該物質(zhì)在體內(nèi)易與含氨基的生物大分子發(fā)生交聯(lián)，形成不可逆的老年色素類物質(zhì)。在血液中，它們易與紅細胞膜上的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)發(fā)生交聯(lián)，引起一系列生理生化變化。本研究以羰基毒化衰老學說為理論基礎，將MDA和谷胱甘肽(GSH)引入到研究體系中，建立了探測中醫(yī)血瘀證及活血化瘀的實驗模型。從紅細胞的表觀粘度、形

2、態(tài)學、羰基蛋白含量及膜脂流動性等方面對羰基的毒化作用及谷胱甘肽的去羰基毒化作用進行了較為系統(tǒng)的研究。 本學位論文研究工作主要分為四大部分： 一、紅細胞懸浮液表觀粘度通過紅細胞表觀粘度的測定，探索了MDA對血液羰基毒化的作用及GSH的拮抗作用。結(jié)果表明：MDA可提高紅細胞表觀粘度；GSH則能夠使之顯著下降，且具有濃度效應，并與反應的先后次序無關(guān)。這說明在正常的血液中普遍存在著羰．氨反應，GSH可阻止或還原這一反應。

3、 二、紅細胞形態(tài)的變化掃描電鏡結(jié)果顯示：MDA的羰基毒化作用能夠引起紅細胞發(fā)生交聯(lián)、聚集，導致其形態(tài)發(fā)生改變；而GSH的拮抗作用則可使紅細胞分散、修復。這從形態(tài)學上反映了MDA與紅細胞膜上蛋白質(zhì)發(fā)生反應的過程。而GSH的巰基能替代紅細胞膜蛋白質(zhì)上的氨基發(fā)生反應，從而阻止羰-氨反應的進行，或?qū)︳?氨反應的產(chǎn)物進行還原。這證實羰基應激對紅細胞的影響主要是作用在紅細胞膜上，這對加深理解和思考體內(nèi)紅細胞的迅速更新也有重要的科學價值。 三

4、、紅細胞膜羰基化蛋白的改變建立了MDA誘導的蛋白質(zhì)羰基毒化模型。采用2，4-二硝基苯肼(DNPH)法測定了牛血清白蛋白(BSA)及紅細胞膜蛋白的羰基化程度，同時探討了GSH的去羰基毒化作用。結(jié)果表明：GSH具有顯著的去羰基毒化作用，并且在一定范圍內(nèi)呈濃度依賴關(guān)系。進一步定量地證實MDA對紅細胞膜蛋白具有損傷作用；GSH的去羰基毒化作用可能正是體內(nèi)抗應激，抗血瘀及亞病態(tài)的極為重要的積極保護和恢復機制之一。 四、紅細胞膜流動性的測定

5、采用1，6-二苯基-1，3，5-己三烯(DPH)熒光標記法檢測了自制磷脂酰膽堿脂膜和紅細胞膜的流動性。結(jié)果表明：MDA使得生物膜的熒光偏振度和微粘度下降，GSH具有抑制作用。這些數(shù)據(jù)從另外一個側(cè)面證實了MDA對脂質(zhì)和蛋白的損傷及GSH的去羰基毒化作用。 以上的實驗結(jié)果從四個方面證實，MDA導致的羰基應激可造成紅細胞損傷和血液粘度增加，而GSH可阻止羰基應激或還原羰-氨反應產(chǎn)物，且具有濃度依賴性。有力地支持了衰老學說中的羰基毒化理