休克腸淋巴對(duì)大鼠紅細(xì)胞代謝的作用.pdf

1、背景：休克發(fā)病學(xué)過(guò)程中的血液流變學(xué)事件，是決策休克臨床救治、影響休克轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵因素。紅細(xì)胞流變行為是影響血液流變性和微循環(huán)的主要因素之一。能量代謝與紅細(xì)胞流變行為密切相關(guān)。近年來(lái)的研究表明，腸淋巴途徑在休克后微循環(huán)障礙乃至多器官損傷的發(fā)病學(xué)中具有重要作用。因此，闡明腸淋巴途徑對(duì)休克后紅細(xì)胞能量代謝的影響成為探討休克腸淋巴液與血液流變性關(guān)系的關(guān)鍵因素。
　　 目的：本研究以腸淋巴液為切入點(diǎn)，應(yīng)用腸淋巴液引流技術(shù)，觀察休克腸淋巴液引

2、流對(duì)失血性休克及液體復(fù)蘇后大鼠紅細(xì)胞三磷酸腺苷(adenosine5’-triphosphate， ATP)、乳酸(lactic acid, LA)、2,3-DPG以及紅細(xì)胞內(nèi)外離子濃度的影響；同時(shí)制備紅細(xì)胞膜懸液，觀察休克腸淋巴液引流對(duì)紅細(xì)胞膜泵活性的影響；進(jìn)一步將引流的休克腸淋巴液輸入正常大鼠，觀察上述指標(biāo)的變化，進(jìn)而探討休克腸淋巴液對(duì)紅細(xì)胞能量代謝的影響，深入揭示腸淋巴途徑在休克發(fā)病學(xué)中的意義，為重癥休克的防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)與理論參

3、考。
　　 方法：①18只Wistar雄性大鼠隨機(jī)均分為假休克組、休克組、休克腸淋巴液引流組（引流組），所有大鼠經(jīng)戊巴比妥鈉肌肉注射麻醉后，行股部手術(shù)，右股靜脈注射肝素鈉全身抗凝，右股動(dòng)脈插管連接生物信號(hào)采集系統(tǒng)，連續(xù)監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈血壓(mean artery pressure， MAP)；左股側(cè)動(dòng)脈插管后連接注射器固定于抽注機(jī)上備放血用；腹部手術(shù)，剝離腸系膜淋巴管。待所有手術(shù)完成、穩(wěn)定30min后，休克組與引流組大鼠經(jīng)左股動(dòng)脈勻

4、速放血，10min內(nèi)將MAP降至40mmHg，復(fù)制失血性休克模型。假休克組大鼠進(jìn)行相同的手術(shù)操作，不放血。引流組大鼠維持低血壓1h后，行腸系膜淋巴管插管，引流休克腸淋巴液至休克3h。②另取18只Wistar雄性大鼠隨機(jī)均分為假休克組、休克后復(fù)蘇組、休克引流并復(fù)蘇組，按前述方法復(fù)制失血性休克模型后，休克后復(fù)蘇組與休克引流并復(fù)蘇組維持低血壓1.5h后，行液體復(fù)蘇（全血量+等量林格氏液）30min，復(fù)蘇結(jié)束后繼續(xù)觀察至3h，其中休克引流并復(fù)蘇

5、組在低血壓1h后引流休克各期淋巴液。③將引流的休克1～3h腸淋巴液去細(xì)胞，淋漿以等量生理鹽水稀釋后回榆至已完成手術(shù)的正常大鼠(2ml/kg，n=6)，時(shí)間為30min，作為休克腸淋巴液輸入組（輸液組）。④休克組維持低血壓3h(或液體復(fù)蘇后3h)、引流組引流休克1～3h腸淋巴液(或液體復(fù)蘇后3h)后、輸液組在輸入休克腸淋巴液結(jié)束后2.5h、假休克組在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，制備血漿，檢測(cè)Na+、K+、Cl-、Ca濃度；部分全紅細(xì)胞標(biāo)本

6、制備紅細(xì)胞內(nèi)液，用于檢測(cè)Na+、K+濃度、2，3-DPG含量；部分全紅細(xì)胞標(biāo)本制備紅細(xì)胞膜懸液，應(yīng)用定磷法檢測(cè)紅細(xì)胞膜泵活性(包括Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase)、ATP（磷鉬酸比色法）、LA（遞氫法）濃度。
　　 結(jié)果：①休克腸淋巴液引流對(duì)大鼠紅細(xì)胞能量代謝與膜泵功能的影響：休克組以及引流組大鼠紅細(xì)胞2，3-DPG、LA含量顯著高于、ATP含量顯著低于假休克組，且引流組2，3-DPG、ATP含量高于休克組；

7、休克大鼠紅細(xì)胞膜Na+-K+-ATPase與Ca2+-ATPase活性顯著低于假休克組，引流組Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性均顯著高于休克組，且與假休克組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；休克組血漿僅K+濃度高于假休克組、引流組紅細(xì)胞內(nèi)液Na+濃度顯著低于休克組。②腸淋巴液引流對(duì)休克復(fù)蘇大鼠紅細(xì)胞能量代謝與膜泵功能的影響：輸液復(fù)蘇后，休克后復(fù)蘇組與休克引流并復(fù)蘇組大鼠紅細(xì)胞ATP含量均顯著低于假休克組，休克引流并復(fù)蘇組2，3-DPG

8、含量、休克后復(fù)蘇組LA含量顯著高于假休克組，休克引流并復(fù)蘇組2，3-DPG、ATP含量顯著高于、LA含量顯著低于休克后復(fù)蘇組；休克后復(fù)蘇組大鼠紅細(xì)胞Na+-K+-ATPase與Ca2+-ATPase活性顯著低于、休克引流并復(fù)蘇組Na+-K+-ATPase活性顯著高于假休克組，休克引流并復(fù)蘇組Na+-K+-ATPase與Ca2+-ATPase活性均顯著高于休克后復(fù)蘇組；休克后復(fù)蘇組大鼠血漿的K+與cl-顯著高于、Ca低于假手術(shù)組。③靜脈輸

9、入休克腸淋巴液對(duì)正常大鼠紅細(xì)胞能量代謝與膜泵功能的影響：回輸休克1～3h腸淋巴液的輸液組大鼠紅細(xì)胞2，3-DPG與LA含量顯著高于、ATP含量、紅細(xì)胞膜Na+-K+-ATPase與Ca2+-ATPase活性顯著低于對(duì)照組。
　　 結(jié)論：研究結(jié)果表明，持續(xù)低血壓大鼠紅細(xì)胞能量代謝障礙的表現(xiàn)為2,3-DPG代償性增加、ATP減少、LA堆積、紅細(xì)胞膜泵活性降低，并引起血鉀升高。休克腸淋巴液引流增強(qiáng)了2，3-DPG的代償、提高了ATP生

10、成、減少LA堆積、提高了膜泵活性；休克復(fù)蘇大鼠出現(xiàn)了ATP減少、LA堆積、膜泵活性降低的能量代謝障礙的表現(xiàn)，休克引流并復(fù)蘇組雖ATP含量減少，但卻明顯促進(jìn)了2，3-DPG的代償、提高了ATP含量、降低了LA水平、提高了膜泵活性、維持了K+與Cl-平衡，對(duì)于休克復(fù)蘇后的紅細(xì)胞能量代謝障礙發(fā)揮了較好的干預(yù)作用；靜脈輸入休克腸淋巴液則降低了正常大鼠的ATP含量與膜泵活性，引起了LA增多；因此，腸淋巴液在休克紅細(xì)胞能量代謝障礙的發(fā)病學(xué)中發(fā)揮重要