鈣穩(wěn)態(tài)在硒拮抗鎘致LMH細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的作用.pdf

1、鎘是自然環(huán)境和工業(yè)環(huán)境中毒性最強(qiáng)的污染物之一，其半衰期長、排泄率低、蓄積能力強(qiáng)，能夠由食物鏈不斷蓄積，進(jìn)而增強(qiáng)其對(duì)人類和動(dòng)物健康的危害。肝臟是鎘蓄積和毒性作用的主要靶器官之一，肝細(xì)胞是鎘主要侵害的靶細(xì)胞之一，肝臟又被稱為硒庫，飼料中硒能夠拮抗鎘的肝毒性，但其具體機(jī)制仍不清楚。鈣穩(wěn)態(tài)與細(xì)胞功能與存活密切相關(guān)。為了揭示硒拮抗鎘致肝細(xì)胞毒性效應(yīng)的機(jī)制，本研究以LMH細(xì)胞為試驗(yàn)對(duì)象，在培養(yǎng)體系中加入硒與鎘，并加入2-APB抑制鈣離子通道，采用M

2、TT、MDC、qRT-PCR、流式細(xì)胞術(shù)及westernblot等方法，對(duì)細(xì)胞活性、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、細(xì)胞自噬、鈣離子調(diào)控等相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行了檢測。研究表明:
　　(1)成功表達(dá)了雞CNX和CRT蛋白抗原多肽，制備了兔抗雞CNX和CRT多克隆抗體，建立了檢測肝細(xì)胞及組織中CNX和CRT蛋白表達(dá)水平的Western blot方法。
　　(2)鎘與硒致LMH細(xì)胞的24 h半數(shù)抑制濃度分別為3.18μM和15.24μM，表明LMH細(xì)胞對(duì)鎘具

3、有高度敏感性，在鎘硒比為2∶1和1∶1時(shí)，硒均能夠拮抗鎘致肝細(xì)胞毒性作用。
　　(3)鎘可以干擾內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志分子ATF4、ATF6、GRP78、GRP94 mRNA表達(dá)，即鎘能夠誘導(dǎo)LMH細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，同時(shí)鎘也可以增加LMH細(xì)胞自噬泡的數(shù)量及自噬標(biāo)志分子Beclin1、P62、ATG3、ATG5和ATG9基因表達(dá)，而硒能夠有效拮抗這些指標(biāo)變化，表明鎘能夠誘發(fā)LMH細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和自噬，這是鎘發(fā)揮毒性作用的重要機(jī)制之一，硒能夠通

4、過有效抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與自噬來發(fā)揮拮抗效應(yīng)。
　　(4)鎘能夠干擾LMH細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子含量、CaM與CaM-Ⅳ基因表達(dá)，增加CNX與CRT基因及蛋白表達(dá)水平，而硒能夠有效拮抗這些指標(biāo)變化，表明鎘能夠誘發(fā)LMH細(xì)胞鈣穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)紊亂，這是鎘發(fā)揮毒性作用的重要機(jī)制之一，硒能夠通過有效抑制鈣穩(wěn)態(tài)紊亂來發(fā)揮拮抗效應(yīng)。
　　(5)應(yīng)用鈣池操縱鈣通道抑制劑2-APB建立鈣釋放阻斷細(xì)胞模型，染鎘后，細(xì)胞毒性、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬現(xiàn)象均有所減輕，表