以肝微粒體孵育的方式尋找抑制CYP2A6酶活性的天然藥用植物.pdf

1、目的:尼古丁是香煙中重要的成分之一,由尼古丁對中樞神經(jīng)的刺激誘導(dǎo)的尼古丁依賴是導(dǎo)致吸煙者成癮及難于戒煙的主要原因。怎樣幫助吸煙者更輕松的戒煙是近幾年來戒煙的重點研究方向。尼古丁的血液濃度對于吸煙者的吸煙習(xí)慣有著重要的作用,尼古丁的血液濃度下降到一定域值時,便會引起吸煙的戒斷癥狀,從而迫使吸煙者反復(fù)吸煙以維持體內(nèi)的尼古丁濃度。近幾年的研究發(fā)現(xiàn)尼古丁的體內(nèi)主要代謝酶CYP2A6酶活性的缺失對于吸煙習(xí)慣的形成以及戒煙難易程度有著重要的影響,通

2、過使用CYP2A6酶抑止劑(甲氧沙林)也可以模擬CYP2A6酶活性缺失的表現(xiàn),減緩尼古丁的體內(nèi)代謝速度,同時降低吸煙的欲望,但是甲氧沙林的副作用限制了它的臨床運用。因此,我們希望通過篩選天然藥物中具有抑制CYP2A6酶活性的物質(zhì),幫助吸煙者更輕松的戒煙。 方法:在本研究中,我們檢測了240種中藥萃取液,中藥萃取液對于CYP2A6酶活性的作用采用肝微粒體孵育的方法評價,孵育液中的代謝產(chǎn)物采用HPLC方法檢測。

3、結(jié)果:通過混和肝微粒體檢測出來的香豆素最大代謝速率為:22.5±36.2 pmol/min/mg protein,米-曼常數(shù)(Km)值為:1.23±10.0μM。在本研究中發(fā)現(xiàn):蛇床(Cnidium monnieri,Umbelliferae)、補骨脂種籽(Psomleae Semen,Leguminosae)、補骨脂果實(Psoraleacorylifolia,Leguminosae)、合歡(Albizzia Julibrissin,

4、Leguminosae)、菊蒿(Tanacetum vulgate,Compositae)和白芷(Angelicae DahuricaeRadix,Umbelliferae)能夠顯著抑制CYP2A6酶活性,以香豆素的代謝產(chǎn)物7-羥化香豆素作為CYP2A6的酶活性指示劑時,半數(shù)抑制濃度(IC50)以及以100μg/ml測量其相對抑制程度分別為:0.7±O.1μg/mlm,0.8[％];1.2±0.2μg/ml,0.1[％];1.2±0.3

5、μg/ml,0.2[％];5.5±0.4μg/ml,5.7[％];2.7±0.7μg/ml,0.8[％];4.0±0.6μg/ml,6.1[％],通過比較萃取劑在孵育系統(tǒng)中的預(yù)孵育和未經(jīng)預(yù)孵育對于這些萃取劑的抑制效應(yīng),發(fā)現(xiàn)預(yù)孵育萃取劑能顯著地增強萃取劑的抑制能力,結(jié)果說明這些中草藥萃取劑抑制CYP2A6酶活性都是機制性抑制(Mechanism Based Inhibit)。 結(jié)論:在本研究中,我們首先測定了韓國人香豆素代謝的

6、米-曼常數(shù),這與以前的研究結(jié)果相似。而香豆素代謝的最大速率與目前已知 的白種人的代謝速率相差40倍，這一結(jié)果與日本人的研究結(jié)果相似，這再次證實了東亞人與白種人在香豆素的代謝速率上存在顯著的種族差異。在本研究中我們發(fā)現(xiàn)了大量的能夠顯著抑制CYP2A6酶活性的天然藥用植物，如蛇床子、補骨脂、菊蒿、白芷和合歡等。由于對尼古丁代謝的孵育體系構(gòu)建不成功，不能夠準(zhǔn)確的反應(yīng)這些抑制劑對酶活性的抑制作用，目前還無法評價這些萃取劑對尼古丁代謝的抑