人肝癌組織AFU多克隆抗體的制備和運(yùn)用.pdf

1、第一部分：人肝癌組織α-L-巖藻糖苷酶的提取和鑒定 目的：提取人肝癌組織的α-L-巖藻糖苷酶(α-L-fucosidase，AFU)經(jīng)純化和鑒定后，為制備特異性多克隆抗體提供純化的抗原。方法：運(yùn)用超濾和離子交換層析等方法提取、純化人肝癌組織的AFU，并經(jīng)SDS-PAGE檢測蛋白純度及相對(duì)分子質(zhì)量。根據(jù)熒光底物4-甲基微型酮-α-L-巖藻糖苷(4-methylumbelliferyl-α-L-fucopyranoside,4-MU

2、-fucoside)和純化的蛋白在特定條件下反應(yīng)生成產(chǎn)物4-甲基微型酮(4-methylumbelliferone,4-MU)的量來檢測酶活性。檢測蛋白濃度用Bradford方法。結(jié)果：提純并純化的AFU經(jīng)SDS-PAGE鑒定有一個(gè)亞單位Mr55000。經(jīng)過一系列純化步驟后，肝癌組織的AFU可得到74倍純化，15％收率。結(jié)論：肝癌組織的AFU可通過離子交換層析法提取和純化并可用于制備抗體。 第二部分：抗人肝癌組織α-L-巖藻糖苷

3、酶抗體的制備及運(yùn)用 目的：制備和純化肝癌特異性α-L-巖藻糖苷酶多克隆抗體及初步研究其在肝癌診斷中的臨床作用。方法：用自行提取和純化的人肝癌組織α-L-巖藻糖苷酶免疫家兔，以間接ELISA檢測抗血清效價(jià)和工作濃度?？寡褰?jīng)陰離子交換法純化后采用Westernblotting鑒定純化的α-L-巖藻糖苷酶。用免疫組化方法定位α-L-巖藻糖苷酶在肝癌組織中的分布情況。結(jié)果：抗血清的效價(jià)和工作濃度經(jīng)間接ELISA檢測分別為1∶32000