旋覆花素抑制內(nèi)皮剝脫和高脂血癥誘導(dǎo)的活性氧產(chǎn)生及生化機(jī)制的研究.pdf

1、目的：活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)在內(nèi)皮剝脫后再狹窄和動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病中扮有重要的角色。ROS能損傷內(nèi)皮細(xì)胞(endotheliacell，EC)，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞(vascularsmoothmusclecell，VSMC)的增殖和凋亡。它與多不飽和脂肪酸(polyunsaturatedfattyacid，PUFA)發(fā)生反應(yīng)生成的脂質(zhì)過氧化物如丙二醛(malondialdehyde，MDA)具

2、有更大細(xì)胞毒性。它對(duì)低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-C)進(jìn)行氧化修飾形成的ox-LDL易被巨噬細(xì)胞吞噬形成泡沫細(xì)胞，在動(dòng)脈粥樣硬化的形成和發(fā)展中具有重要作用。ROS的產(chǎn)生及作用的發(fā)揮與炎癥密切相關(guān)。某些炎癥因子可以促進(jìn)血管壁細(xì)胞ROS的產(chǎn)生，而ROS又可以促進(jìn)一些炎癥因子的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，加重炎癥進(jìn)展。兩者相互作用最終導(dǎo)致血管疾病的發(fā)生。旋覆花素是我們從中藥旋覆花中經(jīng)氯仿抽提得到的有效部位，其中的有效成分是旋覆花內(nèi)酯(1-o-acetylbr

3、itannilactone，ABL)。前期實(shí)驗(yàn)已證實(shí)其能夠抑制內(nèi)皮剝脫后再狹窄的炎癥反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)通過觀察ABL對(duì)內(nèi)皮剝脫后再狹窄模型大鼠及高脂血癥模型大鼠氧化狀態(tài)及血脂的影響，進(jìn)一步了解ABL的藥效。 方法： 1動(dòng)物模型的建立及分組 (1)高脂模型組：將雄性SD大鼠隨機(jī)分為三組：正常組，高脂組，高脂給藥組。正常組普通飼料飲食；高脂組用高脂飼料以15g/只/天喂養(yǎng)60天；高脂給藥組：高脂飼料喂養(yǎng)40天后，灌胃服用A

4、BL粗品，劑量為26mg/kg體重/天。 (2)內(nèi)皮剝脫模型組：將雄性SD大鼠隨機(jī)分為三組：正常組，手術(shù)對(duì)照組，手術(shù)給藥組。正常組普通飼料飲食；手術(shù)對(duì)照組行大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮剝脫術(shù)，術(shù)前3天及術(shù)后灌胃服用無ABL的溶液。手術(shù)給藥于術(shù)前3天及術(shù)后灌胃服用ABL粗品，劑量為26mg/kg體重/天。手術(shù)對(duì)照組及手術(shù)給藥組分別于術(shù)后1天、3天、7天、14天、21天處死。 2標(biāo)本處理 各組大鼠均從股動(dòng)脈放血處死，收集血液標(biāo)本，

5、分離血清；迅速取出肝臟組織，制備肝勻漿，-20℃?zhèn)溆?；取高脂模型組肝臟做病理學(xué)切片觀察脂肪沉積情況；取手術(shù)模型組大鼠主動(dòng)脈中段血管做病理學(xué)切片，染色觀察血管內(nèi)膜增生情況并進(jìn)行形態(tài)測量學(xué)分析。 3血脂含量測定 用全自動(dòng)生化分析儀測定，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行。 4總抗氧化能力(totalantioxidantcapacity，TAOC)、超氧化物歧化酶(superoxidedimutase，SOD)、丙二醛(ma

6、londialdehyde，MDA)的測定 用比色法，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行。 5胱硫醚酶(cystathionineβ-synthase，CBS)的測定 在反應(yīng)緩沖液中加入絲氨酸、吡哆醛磷酸及肝勻漿上清液適量，37℃孵育5min后，再加入L-同型半胱氨酸，37℃孵育60min，用50％三氯乙酸終止反應(yīng)。取上清加入茚三酮充分反應(yīng)，用722型分光光度計(jì)于465nm波長測定反應(yīng)液吸光度值，同時(shí)設(shè)定底物對(duì)照和肝勻漿

7、上清液對(duì)照。 結(jié)果： 1血脂濃度變化 與正常組相比，高脂組血清TC和TG水平顯著升高(P＜0.05)，給藥后血脂被明顯降低(P＜0.05)，但仍高于正常水平。 2形態(tài)學(xué)變化 正常組大鼠肝組織無脂肪變性；高脂組肝細(xì)胞質(zhì)內(nèi)充滿大量大小不等的圓形脂滴，呈明顯脂肪變性。高脂給藥組肝細(xì)胞質(zhì)內(nèi)空泡較少，脂肪變性程度較高脂組減輕。 大鼠主動(dòng)脈病理切片顯示，內(nèi)皮剝脫術(shù)后1天，手術(shù)給藥組及手術(shù)對(duì)照組內(nèi)膜完全

8、消失，表明剝脫完全。術(shù)后3天，手術(shù)對(duì)照組內(nèi)膜表面可見增殖的VSMC。術(shù)后7天，手術(shù)對(duì)照組新生內(nèi)膜增厚，手術(shù)給藥組內(nèi)表面出現(xiàn)增殖的VSMC。術(shù)后14天，兩組內(nèi)膜明顯增厚。隨著術(shù)后時(shí)間的延長，內(nèi)膜增生加重，術(shù)后21天，內(nèi)膜增厚達(dá)到高峰。兩組間比較，手術(shù)給藥組血管內(nèi)膜增生明顯被抑制。形態(tài)測量分析表明：手術(shù)給藥組的內(nèi)膜/中膜厚度比值在7天、14天、21天時(shí)均明顯低于手術(shù)對(duì)照組(P＜0.01，P＜0.05)。 3血清及肝勻漿上清液中TAO

9、C、MDA、CBS、SOD的變化 高脂組血清及肝勻漿上清液中TAOC與正常組相比顯著下降(P＜0.05)，給藥后TAOC被部分恢復(fù)(P＜0.05)。MDA是脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，反映了體內(nèi)的氧自由基含量。CBS也和體內(nèi)的氧化應(yīng)激狀態(tài)密切相關(guān)。高脂組血清及肝勻漿上清液中MDA含量和肝勻漿上清液中CBS活性較正常組增加(P＜0.05)。給予ABL粗品后，二者含量明顯降低(P＜0.05)。SOD變化不明顯。 內(nèi)皮剝脫手術(shù)對(duì)照組術(shù)后血

10、清及肝勻漿上清液中TAOC與正常組相比下降(P＜0.05)，而后逐漸恢復(fù)，但仍低于正常。給予ABL粗品后TAOC被提高：在21天時(shí)，與對(duì)照組相比具有顯著性意義(P＜0.05)。與正常組相比，手術(shù)對(duì)照組血清及肝勻漿上清液中MDA含量顯著增加。手術(shù)給藥組血清及肝勻漿上清液中MDA含量在14天和21天時(shí)與手術(shù)對(duì)照組相比顯著下降(P＜0.05)。手術(shù)給藥組肝勻漿上清液中CBS活性在7天和21天時(shí)和手術(shù)對(duì)照組相比顯著降低(P＜0.05)。SOD變